正常大鼠海马nmda受体2b亚单位蛋白及其mrna的平行分布规律论文

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1、正常大鼠海马NMDA受体2B亚单位蛋白及其mRNA的平行分布规律论文.freelRNA的基础性表达特征及两者在海马不同区域的表达关系。方法正常SD大鼠海马，灌注取脑，连续冰冻切片，ABC免疫组织化学方法染色和原位杂交组织化学染色，光镜下观察NR2B蛋白质及其mRNA的表达。结果NR2B蛋白质在正常大鼠海马CA1区、CA3区及齿状回的免疫反应强度存在明显差异，CA1区最强.freelRNA在正常大鼠海马CA1区、CA3区及齿状回的原位杂交组织化学反应强度与NR2B蛋白质免疫反应强度存在平行变化，也是CA1区最强，CA3区次之，齿状回着色较弱。结论NR2B蛋白质及其mR

2、NA在正常大鼠海马CA1区、CA3区及齿状回的表达强度不同，并存在平行表达差异关系，这种基础状态的分布特征可能与海马缺血易损性和耐受性相关。关键词:NMDA受体;免疫组织化学;原位杂交;海马;大鼠Abstract:ObjectiveTostudythenormalmorphologicaldistributionofimmunoreactiveproteinandmRNAofNMDAre-ceptor2Bsubunit（NR2B）inrathippocampustoinvestigatetherelationbetRNA.MethodsAftertranscardi

3、acperfusionaldehydesolution，thebrainovedtocutserialcryo-sections，munohistochemistryandinsituhybridization（ISH）tostudytheexpressionofNR2BproteinanditsmRNAre-spectively.ResultsNR2BandNR2BmRNAalhippocampalsubfields.Theimmunoreactivi-tyofNR2BRNAinISHmunoreactivityofNR2B.ConclusionItseemsth

4、atthecharactersoftheanatomicaldistri-butionofNR2BandNR2BmRNAmightberelevanttothevulnerabilityoftheCA1subfieldtoischemicinjury.Keymunohistochemistry;insituhybridization;hippocampus;ratN-甲基-D-天门冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartatereceptor，NMDAR）是兴奋性氨基酸（EAA）的一种特异性受体，不仅与突触发育、兴奋性传递、神经元变性等有关，而且NMDA受体介

5、导的神经兴奋性在缺血性脑损伤中起关键作用［1］。目前认为，大鼠NMDA受体是一个异聚体复合物，形成配基门控离子通道，由NR1、NR2A-D和NR3组成［2～4］。其中NR2B受体亚单位是受体复合物的重要调节亚单位，不仅参与介导缺血性脑损伤，而且是突触可塑性、皮质和海马神经元长时程增强效应（long-termpotentiation，LTP）的主要调控者［5］。海马是大鼠前脑的重要结构之一，和学习、记忆等一系列重要生理活动密切相关。在严重的短暂性前脑缺血后，海马CA1区将产生迟发性的神经元坏死，而齿状回（DG）则对缺血性损伤具有抵抗作用，不易出现神经元坏死的现象。了解

6、NR2BmRNA及其编码的亚单位蛋白在海马各区的分布特征，不仅有助于阐明NMDA受体功能的结构基础，还为研制和开发针对NMDAR亚单位mRNA的特异性新药提供理论基础和形态学依据。1材料和方法1.1试验动物健康雄性成年SD大鼠，体重250～300g，由徐州医学院实验动物中心提供。1.2取材切片动物用0.4%戊巴比妥钠（10ml.kg）腹腔麻醉，经心-升主动脉快速灌注生理盐水150ml，继之以4%多聚甲醛，pH7.4，4℃，原位杂交（ISH）时加0.1%二乙基焦磷酰胺（diethylpyrocarbon-ate，DEPC）300ml灌注，30min内灌完。灌注后的大鼠

7、断头、暴露脑，在立体定位仪上，将鼠脑冠状位分成前、中、后3段。取含针道的海马中段入原液内后固定（12h，4℃），依次浸入15%、30%蔗糖PBS（各12h，4℃）。做前脑连续冰冻切片，片厚30μm，切片分组收集。1.3免疫组织化学反应（IHC）①新鲜配制3%H2O2（0.3%的TritonX-100.PBS稀释）室温，10min。②10%正常兔血清（0.3%的TritonX-100.PBS稀释），室温，30min。③NR2B多克隆一抗（美国SantaCruz公司），1∶200，72h，4℃。④生物素化二抗（美国Vector公司），1∶200，12h，4℃。⑤AB