NMDA受体亚单位在成年大鼠脑SVZ区神经干细胞上超微分布的分析

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1、目的脑室下区(SvZ)是成年脑内重要的神经发生区，NMDA受体是中枢神经系统主要的兴奋性氨基酸受体。NMDA受体在SVZ区细胞的超微分布未见报道，鉴于此，本实验研究NMDA受体亚单位NRl、NR2A、NR2B在成年大鼠SVZ区神经干细胞上的超微分布。方法取健康雄性成年SD大鼠，灌注固定，取脑，用同一固定液后固定，做50I．tm振动切片，梯度蔗糖浸泡，液氮冻融处理后，室温下兔血清封闭，应用包埋前免疫电镜双技术，nestin免疫酶组织化学技术显示神经干细胞，免疫金．银标记法显示NRl、NR2A、NR2B，之后取SVZ区免疫反应阳

2、性部位的组织，经系列脱水，置换，Epon812树脂浸润，包埋，聚合，修块，做50nm超薄切片，经醋酸铀、枸橼酸铅双重染色，透射电镜观察、拍照、图像分析。结果1．Nestin免疫反应阳性产物是黑色嗜锇电子致密物，呈絮状分布在成年大鼠SVZ区成神经细胞(A型细胞)、星形胶质细胞(B型细胞)、神经前体细胞(C型细胞)和室管膜上皮细胞(E型细胞)的胞浆内。2．NRl、NR2A、NR2B免疫反应阳性产物呈黑色颗粒状，分布在成年大鼠脑SVZ区上述各型细胞以及毗邻纹状体中神经元的胞膜上和胞浆内，且在胞浆内的高尔基复合体、粗面内质网上可见金

3、颗粒标记。3．双标实验中，成年大鼠脑SVZ区上述四型细胞的胞浆内均可见有NRl、NR2A、NR2B免疫金颗粒与nestin免疫反应阳性产物的共表达。阴性对照朱见任何标记。结论NMDA受体亚单位NRl、NR2A、NR2B在成年大鼠脑SVZ区A型、．3．徐州医学院硕士学位论文B型、C型和室管膜上皮细胞的胞膜和胞浆内以及高尔基复合体、粗面内质网均有表达，且与nostin免疫反应阳性产物在胞浆内共存。关键词NMDA受体亚单位；脑室下区；神经干细胞；包埋前免疫电镜双标技术；超微结构●’徐州医学院硕士学位论文Subcellulardis

4、tributionofNMDAreceptorsubunitintheNSCswithintheSVZoftheadultratsAbstractobjectiveTheadultmammaliansubventricularzone(svz)isanimportantgerminallayer．N—methyl—D—aspartatereceptors(NMDARs)areexcitatoryglutamatereceptorswidelyexpressedinthecentralnervoussystemthatplay

5、keyroles．ThereisnoreportonSubcellulardistributionofNMDAreceptorsubunitinthecellswithintheSVZ．SowestudythesubcellulardistributionoftheNMDAreceptorsubunitsintheneuralstemcellswithinthenormaladultratsubventricularzone．MethodsTookhealthymaleadultSprague—Dawleyrats，foll

6、owedperfusion—fixation，removedbrains，followedbythesamefixativesolution，then50um—thicksectionswerecutwiththevibratingmicrotom，Tissuesectionsweresoakedinthegradedseriesofsucrosesolutions，thawedbyliquidnitrogenandblockedinthe1O％rabbitserum．Neuralstemcellswereshowedbye

7、nzymelabelingandNRl，NR2A，NR2Bwererevealedbyimmunogold—silverlabeling．Withthepre-embeddingimmunoelectonmicroscopytechnique，samplesweresaturatedandembededinEpon812resin，thenpolymerized，afterseriesofdehydrationandsubstitution．50nm—thickultra-thinsectionswerecut，double

8、stainedwithuranylacetateandleadcitrate，andexaminedunderthetransmissionelectronmicroscope，andthenimageanalysiswasdidafterthepicturesweretaken．Resu