《编免疫组化》PPT课件

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1、免疫细胞（组织）化学技术病理教研室金晓明主要讲述内容：第一部分免疫细胞化学的理论基础第二部分免疫荧光细胞化学技术第三部分免疫酶细胞化学技术第四部分免疫电子显微镜技术第一部分免疫细胞化学的理论基础免疫细胞化学是免疫学与细胞化学相结合的一个分支学科，以免疫学的抗原抗体反应为其理论基础。第一节抗原（antigen）一、抗原的概念是一类在合适的条件下，能激发机体免疫系统发生免疫应答，并能与免疫应答产生的效应物质在体内和/或体外发生特异性结合反应的物质。抗原的性能：免疫原性产生免疫应答反应原性产生特异性反应二、抗原决定簇是与相应抗体或淋巴细胞抗原识别受体相结合的部位，是决定和控制抗原特异性的特殊

2、化学基团。类型：功能性抗原决定簇隐蔽性抗原决定簇免疫优势决定簇线性或连续性决定簇构象决定簇或不连续性决定簇B细胞所识别的是半抗原决定簇；T细胞所识别的是免疫原性决定簇或连续性决定簇。三、抗原的性质与种类（一）抗原的性质1、抗原的异物性机体能对进入体内的异种、异体的大分子物质产生免疫应答。该物质与机体的种系关系愈远，其免疫原性愈强，机体的免疫反应也更强。自身抗原；自身抗体2、大分子胶体作为抗原，分子愈大，其免疫原性愈强3、抗原的特异性各种抗原物质各有其特异的抗原决定簇，即一种抗体只能与相应的抗原起反应而不能与其它抗原反应。（二）抗原的种类方法分类依据种类单独存在时是否有免疫原性半抗原和完

3、全抗原抗原来源外源性抗原和内源性抗原抗原与宿主关系异种抗原，同种异体抗原，自身抗原B细胞产生抗体时是否需要T细胞辅助胸腺依赖抗原，胸腺非依赖抗原化学物质蛋白质，多糖，脂蛋白，脂多糖，糖蛋白，核酸等物理状态颗粒性抗原，可溶性抗原产生方式天然抗原，人工合成抗原，基因工程抗原抗原特异性程度特异性抗原，共同抗原完全抗原：同时具有免疫原性和反应原性的物质。不完全抗原或半抗原：无免疫原性。第二节抗体（antibody）一、抗体的概念机体受到抗原刺激后，通过体液免疫应答，B淋巴细胞活化、增殖、分化为浆细胞，由浆细胞合成并分泌的仅与该抗原发生特异性反应的球蛋白。二、抗体的性质和种类（一）抗体的一般性质

4、免疫球蛋白约等于抗体，分五类：IgG,IgM,IgA,IgD,IgE（二）免疫原性和分类特性免疫球蛋白都是大分子蛋白质，具有免疫原性，课作为抗原。由于存在着轻链和重链，可变区和稳定区，因此，分子结构差异较大，免疫原性比较复杂。（三）抗体的种类1、根据抗体的途径或来源不同分为免疫抗体；天然抗体；自身抗体2、根据抗原抗体在试管内是否出现肉眼反应分为完全抗体；不完全抗体三、抗原与抗体反应称为免疫学反应。在体内进行称为免疫反应；在体外称为血清学反应四、抗体形成的机制（一）免疫应答的产生1、感应阶段（识别及加工处理抗原阶段）2、反应阶段（淋巴细胞增殖分化阶段）3、效应阶段（发生免疫反应阶段）（二

5、）影响抗体产生的因素1、抗原的质和量2、机体方面3、佐剂的增强免疫作用第三节有关基本技术方法一、抗体的制备（一）抗体的制备方法能制备出具有很高特异性和敏感性的高效价多克隆和单克隆抗体。1.多克隆抗体（血清抗体］：指机体接受抗原主动免疫或被动免疫后从血清中分离提纯的抗体。2.单克隆抗体：是1975年由KohlenhMilstein发明的一种新技术。其原理是将体外培养的骨髓细胞和免疫的脾细胞相融合，产生杂交细胞。这种融合的杂交细胞既有骨髓细胞的无限生长能力，又有浆细胞分泌单一抗体的能力。将该免疫细胞纯化，成为单克隆系，就能产生大量专一的高纯度的抗体，即单克隆抗体（monoclonalant

6、ibody,McAb)单克隆抗体与多克隆抗体特性的比较特性多克隆单克隆组成多种类抗体的混合物单一种类的抗体特异性低高针对多个抗原决定族针对单一的抗原决定族亲和力平均亲和力较高不定，较低交叉反应高低（二）抗体的配制方法1、抗体贮存2、抗体使用液的配制二、组织材料的处理尽量保存好抗原性不丢失、不扩散、不被破坏三、免疫染色1、增强特异性染色方法蛋白酶消化法；合适的抗体稀释度；温育时间2、减少或消除非特异性染色方法3、显色反应的控制4、复染四、对照阳性对照；阴性对照五、结果的判断（一）阳性细胞的染色特性1、分胞浆、细胞核、细胞膜表面阳性2、灶状和弥漫性3、非特异性的认知4、切片质量不佳出现的阳

7、性要排除（二）染色失败的几种原因第二部分免疫荧光细胞化学技术Coons等（1941）通过荧光标记抗体，并借助于荧光显微镜观察荧光的发光物质，而建立的该项技术。近年来，与激光技术、电子计算机、扫描电镜等技术的结合发展为定量免疫荧光技术。加之荧光激活细胞分类器的应用和激光共聚焦显微镜的问世，开创了免疫荧光技术的新领域。第一节原理一、基本原理免疫荧光技术也是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗体，再用这种荧光抗体（或抗