《细胞电泳》PPT课件

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1、红细胞显微电泳实验实验原理：显微(细胞)电泳是一项有理论意义和实用价值的检测方法。它通过显微镜直接观察分散于液相介质中的微粒在电场中的移动方向和速度，验证微粒表面电荷的符号和密度，进而推测它们的组成和特点。适合光学显微镜观察的微粒的大小约为1～100µm。通过对各种微粒的带电性质进行研究，在多领域科研及生产实践中，例如制药、食品、纺织、印染、油漆、造纸、橡胶、石油、感光材料、塑料、冶金、选矿等等都越来越普遍地受到重视。在上述各学科的教学中，应用显微电泳系统可以直观形象地学习掌握显微电泳技术，验证各种微粒表面电荷的符号和密度，同时也可以开展有关的科学

2、研究工作如测量微粒的ζ电动势等。在医学及生物学领域中，显微电泳技术常用于观察细胞，这时的显微电泳称为细胞电泳。根据细胞表面的电荷密度，推测其构造和功能、大分子物质在细胞表面的吸附，以及在细胞表面进行的免疫反应等等。由于它不破坏细胞的结构，也不用染色等等处理，因此能在近似于生物体的环境中进行观察，得出其它方法无法得到的结果显微（细胞）电泳系统是进行显微观察的必备仪器。*专利设计的显微观察电泳槽为长方扁平形，电泳槽水平放置时内腔高深比值1:20，实际检测值与理论值更为接近。*专利设计的显微观察电泳槽为可拆卸式，清洗极为方便。*专利设计的显微观察电泳槽的

3、两内壁制作了精细的永久性的光学标记，便于定位。由于本显微观察电泳槽高度值较毛细管大很多，可以在一次灌注之后检测100个以上的微粒。彩色（黑白）显微成像系统可将显微镜下的景像通过显示器清晰显示出来，供多人观察。性能及用途检测分析一体化设计；检测微粒电荷的符号、数量及泳动率；能检测多个微粒；自动给出平均数、标准差，并能显示群体电泳速率分布直方图配有彩色成像显示系统、电脑记录分析系统；数据可存储，并可直接打印结果。WD-9408D显微电泳系统WD-9408CWD-9408C控制部分显微电泳槽中间圆形部分异常脆弱，任何时候都不能用力接触，一般都是接触周围四

4、个角电泳槽上层横线电泳槽下层竖线0.202D静止层u0.202=电泳率＋电渗（为0）0.5Du0.5=电泳率＋电渗电渗＝u0.5－u0.202重要参数：任意相邻两线间的距离75微米显微观察槽的深度D=804微米静止层的概念显微电泳技术的一个重要概念。在外加电场的作用下，处在两端封闭的毛细管中不同深度的各层微粒的泳动速度是不同的，因为微粒受到电泳和电渗两种因素的作用。单纯的电泳通常使各层微粒以同一速度移向正极，电渗的情况比较复杂。在外加电场的作用下，沿管壁的一层，以较高的流速流向负极，越是远离管壁，液层的流速越低。管的两端是封闭的，管内的液体流动总是

5、为零。因此，在同一时间内，液体流向正极和负极的量是相等的。流速是逐层变化的，，在两种流向之间，存在流速为零的一层，即为静止层。处在静止层的微粒，泳动速度等于电泳率。准确测定静止层，是显微电泳中一项精细重要的工作。实验材料：新鲜鸭血实验步骤一：样本的准备：1取新鲜鸭血。2配制0.85%生理盐水，每毫升中加入4－5IU（国际单位）的肝素。3取0.5毫升，加0.85%生理盐水－肝素溶液至5毫升，2000转/min离心5分钟，共离心两次。血液沉淀用5－8毫升0.85%生理盐水－肝素溶液稀释备用。电泳槽玻璃小室准备加样时的样子小室卸下的时候用力平推电泳时小室

6、要放平上样时的样子加样大约0.5ml,注意要避免产生气泡，泄漏的溶液要及时清理干净。二显微镜调焦先让微调零可读对准某一个白色的点，然后用粗调调上层横线至清晰用公式计算出静止层所需调整的格数。微调格数N1＝0.202×804（电泳槽的标定深度）/1(微调每格1微米）。微调逆时针旋转所需格数即为静止层。0.5D测量层的调整：计算格数N2＝0.5×804/1－0.202×804/1；在静止层的基础上再逆时针调整N2格数即到0.5D测量层。三观察微粒的选择：可用暂停键结合前进后退键调整所需微粒到竖线处。左右左右左一个计时循环具体测量过程键盘操作，按照上面的

7、数字提示进行设置，设置完成后按数字3开始测量。打印输出系统设置预置数：10－999电渗值：先确定为零，待实验标定后可以记录供日后实验使用。电压：50V四相关结果计算0.202D处测量10个微粒取平均值。0.5D处测量10个微粒取平均值。0.202D静止层u0.202=电泳率＋电渗（为0）0.5Du0.5=电泳率＋电渗电渗＝u0.5－u0.202EMP（电泳率）=S/T:U/LS:微粒泳动距离；U：电压；L：电极之间的长度，T:泳动时间，电泳率：在1V/cm电势梯度下，每秒钟泳动1微米为1个电泳率单位。电动势＝1.2n/3×EMP