《细胞基本培养技术》PPT课件

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1、第四章基本培养技术内容第一节玻璃器皿及塑料制品的清洗与消毒第二节培养操作的基本要领和要求第三节细胞培养的基本技术第一节细胞培养所用玻璃及塑料制品的清洗与消毒一、清洗目的：在组织细胞培养中，体外细胞对任何有害物质都非常敏感,均能影响培养细胞的生长有害物质包括：微生物产品附带杂物上次细胞残留物非营养成分的化学物质需要清洗的培养用品玻璃器皿、胶塞、塑料制品1、玻璃器皿的清洗包括浸泡、刷洗、浸酸和冲洗四个步骤清洗后的玻璃器皿要求：干净透明无油迹不能残留任何物质清洗：自来水洗，烘干泡酸自来水洗去离子水洗三蒸水洗烘干新瓶子均按该程序清洗，培养材料染菌的瓶子经高压灭菌后也

2、按该程序清洗。酸液（洗液）：浓硫酸+重铬酸钾浸泡：初次使用和培养使用后的玻璃器皿均需先用清水浸泡，以使附着物软化或被溶掉。新的初次使用的玻璃器皿先用自来水简单刷洗，然后用5％稀盐酸液浸泡过夜，以中和其中的碱性物质培养瓶浸泡后还需要装满蒸馏水后上高压！！再次使用的玻璃器皿：用后立即浸入水中，要求完全浸入，不能留有气泡或浮在液面上。原因：常附有大量刚使用过的蛋白质，干固后不易洗掉。刷洗：用毛刷沾洗涤剂刷洗，以除去器皿表面附着较牢的杂质。刷洗要适度，过度会损害器皿表面光泽度浸酸：玻璃器皿浸泡到清洁液中的过程注意：浸泡时器皿要充满清洁液，勿留气泡或器皿露出清洁液面。浸泡时

3、间：一般为过夜，不应少于6小时配制、浸泡时应注意安全，须穿戴耐酸手套和围裙，并要保护好面部及身体裸露部分。冲洗在使用后，刷洗及浸泡后都必须用水充分冲洗。使之尽量不留污染或清洁液的残迹。浸泡后的冲洗过程：需流水冲洗十次以上，每次水须灌满及倒干净，蒸馏水浸泡过夜，自来水冲洗5遍，一蒸水5遍，二蒸水3遍，培养瓶要求二蒸水也用流水，烤干备用。2、胶塞的清洗新购置的瓶塞带有大量滑石粉及杂质，应先用自来水冲洗，再做常规处理.常规清洗方法每次用后立即置入水中浸泡，用2%NaOH或洗衣粉煮沸10-20分钟（以除掉培养中的蛋白质），自来水冲洗，蒸馏水冲洗2-3次，晾干备用。3、塑料

4、制品的清洗塑料制品现多是采用无毒并已经特殊处理的包装，打开包装即可用，多为一次性物品。必要时用2%NaOH浸泡过夜，用自来水充分冲洗，再用5%盐酸溶液浸泡30分钟，最后用自来水和蒸馏水冲洗干净，晾干备用。培养板、塑料离心管的清洗同玻璃器皿。但不能放在烤箱中干燥！！二、包装：目的：以便消毒及储存，防止落人灰尘及消毒后再次被污染。包装纸（盒）表面用油性记号笔标明物品名称、消毒日期等！！各种用品的包装器皿的包装分为半包装和全包装培养瓶两个一组全包，包装前盖上螺旋盖子。吸管在与胶头相接端塞上棉花装入吸管筒。青霉素小瓶倒扣在饭盒中，全包。滤器上下口半包装再用报纸包，最后用布

5、包好。大的容器如锥形瓶，加上棉塞后半包装。枪头、EP管装在相应的盒子中，全包。手术器械放在饭盒中，全包。离心管加盖子后全包三、消毒、灭菌防止培养物污染可通过消毒灭菌（将已存在的微生物去除）灭菌sterilization：应用理化方法杀死所有病原微生物、非病原微生物和芽胞。消毒disinfection：应用理化方法杀死微生物，只要求达到无传染性的目的，不要求全部杀死。无菌germfree：没有活菌。防腐antisepsis：应用理化方法防止和抑制微生物生长繁殖。抑菌（bacteriostasis）：抑制体内或体外细菌生长繁殖。常用的抑菌剂为抗生素1、消毒灭菌的方法★

6、物理方法:湿热（高压蒸汽）、干热、紫外线。射线、过滤、离心沉淀等方法杀灭或去除微生物。★化学方法:使用化学消毒剂、抗菌素等杀灭微生物。2、消毒灭菌的注意事项★干热消毒：一般在烤箱中进行，需加温到160℃，保持90－120min方能杀死芽孢。注意！！消毒完毕后不可马上将烤箱门打开，以免冷空气突然进人，影响消毒效果和损坏玻璃器皿或发生意外事故。★湿热消毒：一般使用高压蒸汽灭菌器进行消毒。注意：1、不能装太满，保持消毒器内气体流通。2、在加热升压之前，打开排气阀门，使加热后消毒器内的残留冷空气排出！！关闭排气阀门，开始升压，待达到所需要的压力时，开始记录时间，并控制压力

7、恒定。3、一般物品：布类、金属器械、玻璃器皿等消毒的要求是15磅20min；常规使用液体：消毒15磅15min。4、橡胶和塑料用品：如滤器、EP管、离心管等高压10磅15min。★紫外线消毒：主要用于实验室房间里的空气、操作台表面及桌椅等消毒。时间为30分钟－2小时左右。★过滤除菌消毒：适用于组织细胞培养使用的液体如血清、合成培养液、酶及含有蛋白质具有生物活性的液体等。3、常用设施的消毒及灭菌培养室：紫外线照射、乳酸熏蒸台面：紫外线照射、70%乙醇擦拭培养箱：新洁尔灭擦拭培养瓶、培养皿等：用报纸包好高压蒸汽灭菌滴管、枪头等：装载相应的容器中用报纸包好高压蒸汽灭菌培

8、养板：紫外