不同胆汁酸对胆管癌细胞生物学行为的影响

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1、2009国际肝胆胰外科南通论坛暨第二十二届呈国肝胆胰外科学7fl经验交流舍翁N哪AN们TON刚G删&⋯⋯c《2i≥：：：窖掣爹suRGERYFoRuM且是通过IL．6R刺激细胞增殖，从而提示IL．6可能是胆管癌细胞的一种重要的促生长因子，IL一6的自分泌环路可能在胆管癌的发生、发展中起到了重要的作用19,101。Wehbe等研究发现IL一6的过度表达可以改变启动子甲基化和基因表达，观察显示，IL一6的长期刺激可抑制胆管癌细胞的启动子广泛甲基化和下游调控基因表达上调，促进胆管癌细胞的增殖，如几一6可以使内皮生长因子受体(EGFR)甲基化，后者使EGFR表达增加，细胞活性增加【¨

2、1。Isomoto等研究证实由于细胞信号抑制因子．3(SOCS．3)的沉默导致持续的IL．6的刺激，后者激活胆管癌细胞的细胞信号转导与转录因子一3(STAT．3)传导通路，从而促进胆管癌细胞的增殖【121，可见IL一6在胆管癌肿瘤的形成、进展、诊断及治疗中具有重要的作用。3．3．胆汁酸对IL一6的作用Dvrok等报道在BarreR食管中胆汁酸可以上调IL．6的表达，他们应用GCA、GCDCA、GDCA、DCA和TCA等比混合，用该混合物可以显著提高胃酸对Barrett食管IL．6的表达113】。然而该实验并没有研究各胆汁酸对IL．6的作用，目前尚无各胆汁酸对胆管癌细胞IL．6

3、作用的报道。我们应用结合胆汁酸GCA、GCDCA、GDCA及其对应的游离胆汁酸CA、CDCA、DCA作用与胆管癌细胞。分别在24h、48h、72h检测几．6的表达，结果发现GCA、C,-CDCA和GDCA均可以提高胆管癌细胞IL．6的表达量，并具有时间依赖性，而CA，CDCA和DCA却可以抑制胆管癌细胞IL一6的表达。这一结果显示不同胆汁酸可能通过改变IL．6的表达而调节胆管癌细胞的生物学行为。总之，结合胆汁酸促进胆管癌细胞IL．6的表达，而游离H．n亍t酸抑制胆管癌细胞几．6的表达，11,．6表达的改变是胆汁酸促进肿瘤发生发展的机制之一。参考文献：略不同胆汁酸对胆管癌细胞生

4、物学行为的影响王坚张超峰何敏王伟陈涛鲁嘉越戴佳奇上海交通大学医学院附属仁济医院普外科(200127)胆管癌有多种危险因素，如：肝吸虫病、原发性硬化性胆管炎、Caroli’s病、先天性胆管囊肿及胆管结石等，这些危险因素都会导致胆汁淤积。胆汁酸是胆汁淤积过程中的主要成分，近年来胆汁酸和胆管癌的关系也越来越受到关注[1,2,31，然而目前尚无各种胆汁酸对胆管癌细胞作用的系统研究，本研究从结合和游离胆汁酸的角度，研究不同胆汁酸对胆管癌细胞生物学行为的作用1．材料与方法1．1．RPMll640培养基购自GIBCO公司，胎牛血清均购自西班牙Biowest公司，流式细胞凋亡试剂盒Annex

5、inV．FITC、PI试剂盒购自Invitrogen公司，四甲基偶氮唑蓝(MTT)，二甲基亚砜(DMSO)购自sigma公司，GCA、GCDCA、GDCA、CA、CDCA、DCA均购自德国sigma公司，细胞株购自同济大学医学院。317NANToNGHEPATOBILIARY&PANCREATlCSURGERYFoRUM矿知。、2009国际肝胆胰外科南通论I云l≤薹参’鐾第二十二届呈国肝胆胰外科学7ft经验交流会1．2．方法1．2．1．细胞培养和传代人胆管癌细胞系QBC939细胞株购白同济大学。细胞培养于含10％胎牛血清RPMI一1640培养基中，培养环境为370C，含5％C

6、02的恒温恒湿培养箱，当细胞融合度为培养瓶的90％时，用0．25％胰酶消化细胞并传代(传代周期一般为3天)，加胆汁酸刺激前24小时铺板，6孔板3×105个／孔，96孔板8×103个／孔，加药时改用含1％胎牛血清培养基。1．2．2．各胆汁酸对胆管癌细胞活力的影响实验分组：取96孔板，分为空白组(不加胆汁酸与溶媒)、对照组(溶媒)、胆汁酸处理组(各胆汁酸试剂用灭菌蒸馏水配制成溶液)，GCA浓度设oⅢx,l(溶媒)，400ⅢM，8000M，12000M，16001aM。GCDCA浓度设0洲，IOOvM，2001xM，3009M，400山VI。GDCA浓度设O州，100btM，200

7、1．dVI，300pM，400pM。CA浓度设0州，2009M，400lxM，6009M，800“M，lOOO山Vf。CDCA浓度设00M，50川VX，1001．tM，150Nvi，200ⅢM，250ktlVl。DCA浓度设00M，50}，tM，100taM，1500M，200taM，250山V1，每个浓度设5个复孑LJJI：I药前24h接种于96孔培养板中，然后在各实验组加入不同浓度的胆汁酸，分别在24h，48h，72h后检测细胞活力，检测前4小时，每孔加入20山5mg／mlMTT，吸去培养基，加15