《液相色谱实验基础》PPT课件

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1、液相色谱基础本章内容：液相色谱发展史液相色谱的基本概念影响峰形扩展的因素历史回顾1906-MikhailSemenovichTswett(1872-1919)碳酸钙吸附剂石油醚1940‘s-分配色谱和纸色谱1950‘s-气相,薄层，凝胶过滤色谱梯度洗脱色谱1960‘s-商业高效液相色谱.0NNNNMgCHCH23CH3CH3HC30CH3CH3CH30CH300高效液相色谱(HPLC)进样口检测器色谱图色谱柱溶剂泵混合器HPLC结构框图HPLC结构框图液相色谱类型TypesofCompoundsSeparatedNeutralsWeakAcidsW

2、eakBasesIonics,Bases,AcidsCompoundsInsolubleinWater,OrganicIsomersIonicsInorganicIonsHighMWCompoundsPolymersModeReversed-PhaseIo子n-PairNormal-PhaseIonExchangeSizeExclusionStationaryPhaseC-18,C-8,C-18,C-8Silica,Amino,CyanoDiolAnionorCationExchangePolystyreneMobilePhaseWater/Org

3、anicModifiersWater/OrganicIon-PairReagentOrganicsAqueous/BufferCounterIonGelFiltration-AqueousGelPermeation-OrganicSilicaResinC-4,C-2化合物类型模式固定相流动相中性弱酸弱碱反相C18,C8,C4氰基,氨基水/有机改性剂离子、碱性、酸性离对C-18,C-8水/有机的离子对试剂不溶于水的化合物正相硅胶、氨基、腈基、二醇有机物离子型无机离子离子交换阴离子或阳离子交换树脂水/缓冲溶液对离子高分子量化合物聚合物体积排阻聚苯乙烯硅

4、胶凝胶过滤-水性的凝胶渗透-有机的色谱参数DetectorResponseTimeABWWABInjectt0tR(A)tR(B)t=保留时间t=死时间RW=峰底宽度0－定性和定量tR(B)-tR(A)WA+WBR=2tR(B)-tR(A)W1/2A+W1/2B=1.176K’=tR-t0t0不同R值的峰重叠R=1.5可以得到基线分离0.40.50.60.70.81.001.25影响R值的因素ΔtW=R=1/4Nxα-1xk'1+k'容量因子选择性柱效α容量因子各组份的容量因子（K’）随溶剂洗脱强度的变化增大或缩小增加流动相的洗脱强度，降低了洗脱物

5、的容量因子对于反相色谱，增加10％的有机组成等于降低每个色谱峰的K’值的1/2到2/3。溶剂洗脱强度弱溶剂洗脱强度强246810110070030010060%AcetonitrileTime(min.)mAU20001600600080%AcetonitrileTime(min.)mAU100040%Water20%Water246810分离选择性改用不同的流动相改变流动相的组成改变流动相pH值改变柱温应用特殊的化学效应改变固定相(α)改变分离选择性α的方法t0=1=k'k'BAAB23AB12AB12==1.641.58=1.04=1.150.

6、85=1.35=0.950.63=1.50k'k'BAαααα温度对分离选择性α的影响40℃60℃1005TimeinMinutes柱效DetectorResponseInjectTime高柱效低柱效扩散h=A+CuBu.HETPBuC.uA线速度A=涡流扩散B=自由分子扩散C=传质阻力范德姆特方程TheVanDeemterEquation+AA=涡流扩散——多径扩散仔细填充柱子使用均一的载体线速度HETP扩散初始带宽最终带宽扩散BB=自由分子扩散——纵向扩散在液相中影响小在低流速中影响大线速度HETP扩散C.uC=传质阻力在低流速下可以降低传质

7、阻力使用小颗粒载体可以降低传质阻力HETP线速度滞流的流动相流动相固定相柱外效应样品体积I.连接管路的体积色谱柱进口设计色谱柱出口设计检测池体积(<10µL)II.III.IV.V.降低输出回路响应时间VI.如何提高分离度通过下述方法增加保留时间:选择合适的分离参数增加色谱柱长度增加固定相浓度通过下述方法降低谱带宽度:使用均一的载体仔细填充柱子选择粒度小的载体优化流速减小进样量降低系统死体积降低输出回路响应时间HPLC仪器简介本章内容：流动相及贮液罐高压输液泵及梯度洗脱装置进样装置色谱柱检测器色谱数据处理装置优化流路减小死体积流路自上而下堆积配置手

8、持控制器检测器柱温箱自动进样器泵脱气机溶剂柜HP-IB外设(x4)每个部分有独立的电源1100各部件均由CAN线连接检测器