《液相色谱基础》PPT课件

《《液相色谱基础》PPT课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、液相色谱基础知识第一节色谱法概述第二节液相色谱法第三节液相色谱图相关术语第四节HPLC的主要类型及原理第一节色谱法概述一、色谱法简介二、色谱法的定义和分类三、气相色谱和液相色谱的区别四、色谱法的分离原理关于色谱色谱是一种分离工具，而不是传统意义上的分析仪器常见的分离方式：蒸馏、离心、电泳、过滤、超滤等等色谱是其中一种分离工具一、色谱法简介色谱法（Chromatography）溯源俄国科学家Tswett1903年发现色谱的吸附原理，开创了应用吸附原理分离植物色素的新方法并见诸于俄文的文献1906年正式命名（见诸文献

2、）色谱法；Chromatography50年代开始广泛研究和应用主要是气相色谱及薄层色谱高效液相色谱法的广泛应用始于70年代色谱的发明人俄国科学家：M.S.Tswett正式命名“色谱”的文献色谱起源石油醚碳酸钙颗粒色素玻璃柱经典液相色谱二、色谱法的定义和分类色谱法的定义：色谱法又称色层法或层析法，是一种利用不同溶质(样品)与固定相和流动相之间的作用力(分配、吸附、离子交换等)的差别，当两相做相对移动时，各溶质在两相间进行多次“平衡”，使各溶质达到相互分离的方法。固定相：在色谱分离中固定不动、对样品产生保留的一相。

3、流动相：在层析过程中推动固定相上的物质向一定方向移动的液体或气体。色谱法的分类根据流动相的状态将色谱法分成四大类。表1色谱法以流动相种类的分类色谱类型流动相主要分析对象气相色谱法气体挥发性有机化合物液相色谱法液体溶于水或有机溶剂的各种物质超临界色谱法超临界流体各种有机化合物电色谱法缓冲溶液、电场离子和各种有机化合物1.按两相分子的聚集状态分类2.按固定相的固定方式分类平面色谱纸色谱薄层色谱高分子薄膜色谱柱色谱填充柱色谱毛细管柱色谱分配色谱：利用分配系数的不同吸附色谱：利用物理吸附性能的差异离子交换色谱：利用离子交

4、换原理空间排阻色谱：利用排阻作用力的不同3.按分离机制分类流动相固定相类型液体固体液-固色谱液体液体液-液色谱气体固体气-固色谱气体液体气-液色谱液相色谱气相色谱三、液相色谱与气相色谱的比较液相色谱所用基本概念与所用基本理论均与气相色谱一致。但由于在液相色谱中以液体代替气相色谱中的气体作为流动相，而液体和气体的性质不相同；此外，液相色谱所用的仪器设备和操作条件也与气相色谱不同，所以，液相色谱与气相色谱有一定差别。（1）应用范围不同气相色谱仅能分析在操作温度下能气化而不分解的物质。对高沸点化合物、非挥发性物质、热不

5、稳定化合物、离子型化合物及高聚物的分离、分析较为困难；而液相色谱则不受样品挥发度和热稳定性的限制，它非常适合分子量较大、难气化、不易挥发或对热敏感的物质、离子型化合物及高聚物的分离分析。（2）液相色谱能完成难度较高的分离工作①气相色谱的流动相载气是惰性的，不参与分配平衡过程，与样品分子无亲和作用，样品分子只与固定相相互作用。而在液相色谱中流动相液体也与固定相争夺样品分子，为提高选择性增加了一个因素。②液相色谱固定相类型多，如离子交换色谱和排阻色谱等，作为分析时选择余地大；而气相色谱是不可能的。③液相色谱通常在室温

6、下操作，较低的温度，一般有利于色谱分离条件的选择。四、色谱法的分离原理1．液固色谱法分离原理：使用固体吸附剂，根据固定相对样品组分吸附力大小不同而分离。分离过程是一个吸附－解吸附的平衡过程。吸附剂：为硅胶或氧化铝，粒度5-10μm。适用对象：适用于分离分子量200-1000的组分，大多数用于非离子型化合物，常用于分离同分异构体。2．液液色谱法使用将特定的液态物质涂于基质表面，或化学键合于基质表面而形成的固定相，分离原理是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离。分离过程是一个分配平衡过程。液液色谱法按固

7、定相和流动相的极性不同可分为正相色谱法(NPC)和反相色谱法(RPC)。正相色谱法采用极性固定相（如聚乙二醇、氨基与腈基键合相）；流动相为相对非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。常用于分离中等极性和极性较强的化合物。反相色谱法一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。适用于分离非极性和极性较弱的化合物。正相色谱法与反相色谱法比较表正相色谱法反相色谱法固

8、定相极性高-中中-低流动相极性低-中中-高组分洗脱次序极性小先洗出极性大先洗出第二节液相色谱法一、液相色谱的分类二、高效液相色谱的特点三、高效液相色谱法的仪器配置四、高效液相色谱的基本流程五、高效液相色谱的应用液相色谱的分类根据固定相的使用形式将液相色谱分成以下几类：1.柱色谱：固定相装在玻璃管或金属管内，或涂在柱内壁上。又分为填充柱色谱和空心毛细管色谱两种类型。2.纸色