GB 4789.11-2014 食品安全国家标准 食品微生物学检验 β型溶血性链球菌检验

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1、中华人民共和国国家标准GB4789.11-2014食品安全国家标准食品微生物学检验β型溶血性链球菌检验2014-12-01发布2015-05-01实施GB4789.11—2014前言本标准代替GB/T4789.11－2003《食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验》。本标准与GB/T4789.11－2003相比，主要变化如下：——修改了标准名称；——修改了范围；——增加了术语和定义；——修改了设备与材料；——修改了培养基与试剂；——删除了以无菌生理盐水稀释样品的步骤和杆菌肽敏感试验；——增加了触酶试验；——增加了附录A。IGB4789.11—2014

2、食品安全国家标准食品微生物学检验β型溶血性链球菌检验1范围本标准规定了食品中β型溶血性链球菌（Streptococcus）的检验方法。本标准适用于食品中β型溶血性链球菌的检验。2术语和定义2.1β型溶血在菌落周围形成完全透明的溶血环，红细胞完全溶解。2.2β型溶血性链球菌能够产生β型溶血的化脓（或A群）链球菌（Streptococcuspyogenes）和无乳（或B群）链球菌（Streptococcusagalactiae）。3设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：a)恒温培养箱：36℃±1℃；b)冰箱：2℃～5℃；c)

3、厌氧培养装置；d)天平：感量0.1g；e)均质器与配套均质袋；f)显微镜：10倍～100倍；g)无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头；h)无菌锥形瓶：容量100mL、200mL、2000mL；i)无菌培养皿：直径90mm；j)pH计或pH比色管或精密pH试纸；k)水浴装置：36℃±1℃；l)微生物生化鉴定系统。4培养基和试剂4.1改良胰蛋白胨大豆肉汤（Modifiedtryptonesoybeanbroth,mTSB）：见附录A中A.1。4.2哥伦比亚CNA血琼脂(ColumbiaCNAblooda

4、gar)：见附录A中A.2。4.3哥伦比亚血琼脂(Columbiabloodagar)：见附录A中A.3。4.4革兰氏染色液：见附录A中A.4。4.5胰蛋白胨大豆肉汤（Tryptonesoybeanbroth,TSB）：见附录A中A.5。4.6草酸钾血浆：见附录A中A.6。1GB4789.11—20144.70.25％氯化钙(CaCl2)溶液：见附录A中A.7。4.83％过氧化氢(H2O2)溶液：见附录A中A.8。4.9生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡。5检验程序溶血性链球菌检验程序见图1。样品25g（或mL）+225mLmTSB36℃±1℃18h~24

5、h划线接种哥伦比亚CNA血琼脂平板36℃±1℃18h～24h，厌氧培养挑取可疑菌落，接种哥伦比亚血琼脂平板和TSB36℃±1℃18h～24h革兰氏染色镜检/触酶试验确定鉴定链激酶试验(选做项目)生化鉴定报告图1溶血性链球菌检验程序6操作步骤6.1样品处理及增菌按无菌操作称取检样25g（mL），加入盛有225mLmTSB的均质袋中，用拍击式均质器均质1min～2min；或加入盛有225mLmTSB的均质杯中，以8000r/min～10000r/min均质1min～2min。若样品为液态，振荡均匀即可。36℃±1℃培养18h～24h。6.2分离将增菌液

6、划线接种于哥伦比亚CNA血琼脂平板，36℃±1℃厌氧培养18h～24h，观察菌落形态。溶血性链球菌在哥伦比亚CNA血琼脂平板上的典型菌落形态为直径约2mm～3mm，灰白色、半透2GB4789.11—2014明、光滑、表面突起、圆形、边缘整齐，并产生β型溶血。6.3鉴定6.3.1分纯培养挑取5个（如小于5个则全选）可疑菌落分别接种哥伦比亚血琼脂平板和TSB增菌液，36℃±1℃培养18h～24h。6.3.2革兰氏染色镜检挑取可疑菌落染色镜检。β型溶血性链球菌为革兰氏染色阳性，球形或卵圆形，常排列成短链状。6.3.3触酶试验挑取可疑菌落于洁净的载玻片上，

7、滴加适量3%过氧化氢溶液，立即产生气泡者为阳性。β型溶血性链球菌触酶为阴性。6.3.4链激酶试验（选做项目）吸取草酸钾血浆0.2mL于0.8mL灭菌生理盐水中混匀，再加入经36℃±1℃培养18h～24h的可疑菌的TSB培养液0.5mL及0.25%氯化钙溶液0.25mL，振荡摇匀，置于36℃±1℃水浴中10min，血浆混合物自行凝固（凝固程度至试管倒置，内容物不流动）。继续36℃±1℃培养24h，凝固块重新完全溶解为阳性，不溶解为阴性，β型溶血性链球菌为阳性。6.3.5其他检验使用生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡对可疑菌落进行鉴定。7结果与报告综合以上试验

8、结果，报告每25g（mL）检样中检出或未检出溶血性链球菌。3GB4789.11—2014附录A培养基与试剂A.1改良胰蛋白