GB 4789.11-1994 食品卫生微生物学检验 溶血性链球菌检验

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1、中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验GB4789.11一94溶血性链球菌检验代替GB4789.11-84MicrobiologicalexaminationoffoodhygieneExaminationofStreptococcushemolyticus1主皿内容与适用范围本标准规定了食品中溶血性链球菌的检验方法.本标准适用于食品和食物中毒样品中溶血性链球菌的检验。2引用标准GB4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材科3.1温箱:36士1"C,3.2水浴:36士1'C。3.3显徽镜.

2、3.4离心机。3.5试管架。3.6灭菌平皿。3.了灭菌小试管。3.8载玻片。3.9灭菌吸管:1mL,10mL,3.10灭菌镊子。3.11均质器。3.12酒精灯。3.13接种环。4培养基和试荆4.月..葡萄搪肉漫液肉汤:按GB4789.28中4.1规定，在肉浸液肉汤内加入1%葡萄糖。4.六乙肉浸液肉汤:按GB4789.28中4.1规定。4.口︺匹克氏肉汤:按GB4789.28中4.62规定。4.月﹃血琼脂平板:按GB4789.28中4.6规定。4.只︺人血浆。4.心U0.25%抓化钙。东7，灭菌生理盐水。中华人民共和国

3、卫生部1994一03一18批准1994一09一01实施GB4789.11一944.8杆菌肤药敏纸片(含0.04单位)。检验程序检样26g(mL)+226.L灭菌生理盆水36士1'C荀萄格肉搜液肉汤血平板或匹克氏肉汤36士1CI24h血平板(分纯培养)36士ICI24h涟段醉试验杆菌肤敏撼试验观察落血革兰氏染色报告6操作步骇6.1样品处理称取25g固体检样;称取25mL液体检样，加入225mL灭菌生理盐水，研成匀浆制成混悬液。6.2一般培养.将上述混悬液吸取5mL，接种于50mL葡萄糖肉浸液肉汤;或直接划线接种于血平板

4、，如检样污染严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经36士1℃培养24h，接种血平板.置36士1℃培养24h，挑起乙型溶血图形突起的细小菌落，在血平板上分纯，然后观察溶血情况及革兰氏染色，并进行链激酶试验63形态与染色本菌呈球形或卵圆形，直径0.5^-1dam,链状排列，链长短不一，短者4^-8个细胞组成，长者20^-30个，链的长短常与细菌的种类及生长环境有关;液体培养中易呈长链;在固体培养基中常呈短链，不形成芽抱，无鞭毛，不能运动。6.4培养特性该菌营养要求较高，在普通培养基上生长不良，在加有血液、血清培养基中生长

5、较好。溶血性链球菌在血清肉汤中生长时管底呈絮状或顺粒状沉淀。血平板上菌落为灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直径约。.5-0.75mm，为圆形突起的细小菌落，乙型溶血链球菌周围有2-4mm界限分明、无色透明的溶血圈。65链激酶试验致病性乙型溶血性链球菌能产生链激酶(即溶纤维蛋白酶)，此酶能激活正常人体血液中的血浆蛋白酶原，使成血浆蛋白酶，而后溶解纤维蛋白。吸取草酸钾血浆0.2mL，加0.8mL灭菌生理盐水，混匀，再加入18^-24h36士1℃培养的链球菌培养物0.5mL及0.25%氯化钙0.25mL如氯化钙已

6、潮解.可适当加大至0.3%^0.35%),振荡摇匀，置于36士1℃水浴中10min，血浆混合物自行凝固(凝固程度至试管倒置，内容物不流动)。然后观察凝GB4789.11一94块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h后不溶解即为阴性。草酸钾人血浆配制:草酸钾。.01g放入灭菌小试管中，再加人5mL人血，混匀，经离心沉淀，吸取上清液即为草酸钾人血浆。66.杆菌肚敏感试验挑取乙型溶血性链球菌液，涂布于血平板上，用灭菌摄子夹取每片含有。.04单位的杆菌肤纸片，放于上述平板上，于36士1℃培养18^24h，如有抑菌带出现

7、即为阳性。同时用已知阳性菌株作为对照。附加说明:本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准由北京市卫生防疫站负贵起草。本标准主要起草人刘以贤。本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。