GB 4789.28-1994 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂

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1、中华人民共和国国家标准曲食品卫生微生物学检验4789.28-94染色法、培养基和试剂储GB4789.2884MicrobiologicalexaminationoffoodhygieneStainningmethods,culturemediumsandreagents1主题内容与适用范围本标准规定了各种染色法、培养基和试剂。本标准适用于食品和食物中毒样品中各类微生物的检验。2染色液配制及染色法2.1美蓝染色法2.，.，吕氏碱性美蓝染色液美蓝0.3g95%乙醇30mL。01%氢氧化钾溶液100mL将美

2、蓝溶解于乙醉中，然后与氢氧化钾溶液混合。2.，.2染色法将涂片在火焰上固定，待冷。滴加染液，染1-3min，水洗，待干，镜检。2.1.3结果菌体呈蓝色。2.2革兰氏染色法2.2.1结晶紫染色液结晶紫1995%乙醇20mL100草酸钱水溶液80mL将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸馁溶液混合。2.2.2革兰氏碘液碘19碘化钾29蒸馏水300mL将碘与碘化钾先进行混合，加人蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300mLo2.2.3沙黄复染液沙黄0.25995%乙醇10mL蒸馏水一90mL中华人民

3、共和国卫生部1994一03-18批准1994一09一01实施Gs4789.28一94将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。2.2.4染色法2.2.4.1将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。2.2-4.2滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。2.2.4.3滴加95乙醇脱色，约30s;或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10so2.2-4.4水洗，滴加复染液，复染1min。水洗，待干，镜检。2.2.5结果革兰氏阳性菌呈紫色。革兰氏阴性菌呈红色。注亦可用1:10稀释石

4、炭酸复红染色液作复染液，复染时间仅需10。。2.3耐酸性染色法(垂一倪二氏法)2.3.1石炭酸品红染色液碱性品红0.3g95%乙醇10mL5%酚水溶液90mL将品红溶解于乙醇中，然后与酚溶液混合。2.3.23%盐酸一乙醇浓盐酸3mL95%乙醇97mL2.3.3复染液吕氏碱性美蓝染色液。2.3.4染色法2.3.4.1将涂片在火焰上加热固定，滴加石炭酸品红染色液，徐徐加热至有蒸气出现，但切不可使沸腾。染液如因蒸发减少时，应随时添加。染5min，倾去染液，水洗。2.3-4.2滴加盐酸一乙醇脱色，直至无红色脱

5、落为止(所需时间视涂片厚薄而定，一般为1^-3min)，水洗。2.3-4.3滴加吕氏碱性美蓝染色液，复染30.1min，水洗，待干，镜检。2.3.5结果:耐酸性细菌呈红色，其他细菌、细胞等物质呈蓝色。2.4柯氏染色法2.4.1染色液2.4，，10.5%沙黄液。2.4.1.20.5%孔雀绿液。2.4.2染色法2.4.2.1将涂片在火焰上固定，滴加。.5%沙黄液，并加热至出现气泡，约2^-3min，水洗。2.4-2.2滴加。.5%孔雀绿液，复染4050s。水洗，待干，镜检。2.4.3结果布氏杆菌呈红色，其

6、他细菌及细胞呈绿色。2.5奥尔特氏英膜染色法2.5.1染色液沙黄39蒸馏水100ml,用乳钵研磨溶解。2.5.2染色法cg4789.28一94将涂片在火焰上固定，滴加染色液，并加热至产生蒸气后，继续染3min。水洗，待干，镜检。2.5.3结果炭疽芽胞杆菌菌体呈赤褐色，荚膜呈黄色。2.6瑞氏染色法2.6.1染色液瑞氏色素0.1g甲醇60mL用乳钵研磨溶解。2.6.2染色法2.6.2.1涂片待自然干燥后，滴加染色液，固定1min,2.6.2.2加人等量蒸馏水(pH6.5),染色3-5min,2.6-2.3

7、用燕馏水冲洗，待干，镜检。2.7鞭毛染色法2.了.，染色液的配制2.7.1.1甲液:称丹宁酸5g,氯化高铁(FeC13)1.5g,溶于100mL蒸馏水中，待溶解后加入1%的氢氧化钠溶液1mL和15%的甲醛溶液2mL,2.7.1.2乙液:称2g硝酸银溶于100mL蒸馏水中。在90mL乙液中滴加浓氢氧化按溶液，到出现沉淀后，再滴加使其变为澄清，然后用其余10mL乙液小心滴加至澄清液中，至出现轻微雾状为止(此为关键性操作，应特别小心)。滴加氢氧化馁和用剩余乙液回滴时，要边滴边充分摇荡，染液当夭配，当天使用，

8、2^-3d基本无效。2.7.2染色法在风干的载玻片上滴加甲液,4^-6min后，用蒸馏水轻轻冲净。再加乙液，缓缓加热至冒汽，维持约半分钟(加热时注意勿使出现干燥面)。在菌体多的部位可呈深褐色到黑色，停止加热，用水冲净，干后镜检，菌体及鞭毛为深褐色到黑色。2.8碱性复红染色法将0.5g碱性复红染料溶解于20mL95%乙醇中，然后用蒸馏水稀释至100mL。如有不溶物时，可用滤纸过滤，或静置后取上清液备用。注:本染色液系用于苏云金芽胞内蛋白质毒素结晶的染色，藉