染色法、培养基和（微生物检验）试剂配制作业指导书

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1、修改记录单版本时间简述A2003-11-15新发行A2004-06-02品控部改为品质部染色法、培养基和（微生物检验）试剂配制作业指导书1目的对染色法、培养基和试剂配制方法作出明确规定，为检测结果的准确性提供最基本的保证。2范围适用于微生物检验。3职责3.1微检人员负责培养基、试剂配制。3.2微检人员掌握微生物的染色方法。4培养基和试剂配制名称、用途名称用途4.1革兰氏染色液微生物染色4.2营养琼脂细菌培养和细菌总数测定4.3孟加拉红培养基霉菌、酵母菌计数4.4乳糖胆盐发酵管大肠菌群，粪大肠菌群及大肠

2、杆菌的测定4.5乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用4.6三糖铁琼脂肠杆菌科细菌的生化反应筛选4.7伊红美兰琼脂分离肠道致病菌。4.8缓冲蛋白胨水沙门氏菌检验中的前增菌4.9四硫酸钠煌(TTB)绿增菌液沙门氏菌检验中的前增菌4.10GN增菌液志贺氏菌的前增菌4.11亚硒酸盐胱氨酸增菌液沙门氏菌选择性增菌培养4.12SS琼脂沙门氏菌、志贺氏菌的分离4.13V-P半固体琼脂细菌检验的V-P试验4.147.5%氯化钠肉汤金黄色葡萄球菌的增菌培养4.15Baird-Parker培养基金黄色葡萄球菌的检验4.16酸性

3、肉汤酸性罐头食品商业无菌检验4.17尿素琼脂基础细菌检验中的尿素酶试验4.18赖氨酸脱羧酶培养基细菌检验中的赖氨酸脱羧酶试验4.19吲哚培养基细菌靛基质试验，亦称色氨酸肉汤4.20硝酸盐氰化钾培养基细菌检验中的硝酸盐还原试验和氰化钾试验4.21生理盐水检样的溶解与稀释5具体内容5.1革兰氏染色法5.1.1革兰氏染色液5.1.1.1结晶紫染色液成份：结晶紫1.0g95%乙醇20.0ml1%草酸铵水溶液80.0ml5.1.1.2革兰氏碘液成份：碘1.0g碘化钾2.0g蒸馏水300.0ml5.1.1.395

4、%乙醇5.1.1.4沙黄复染液成份：沙黄0.25g95%乙醇10.0ml蒸馏水90.0ml5.1.2染色法5.1.2.1将涂片在火焰上固定。5.1.2.2初染：滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。5.1.2.3媒染：滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。5.1.2.4脱色：滴加95%乙醇脱色，水洗；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s，水洗。5.1.2.5复染：滴加沙黄复染液，染1min，水洗，待干，镜检。5.1.2.6结果判定：革兰氏阳性菌呈紫色；革兰氏阴性菌呈红色。5.2

5、一般培养基和专用培养基5.2.1营养琼脂5.2.1.1用途：用于一般细菌培养及细菌总数测定。5.2.2.2成份（g/L）：蛋白胨10.0牛肉粉3.0氯化钠5.0琼脂15.0PH7.3±0.15.2.2.3制法:称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121℃15min高压灭菌备用。5.2.2.4注意事项：密封保存于阴凉干燥处。5.2.2孟加拉红培养基5.2.2.1用途：用于粮食、食品、饮料中霉菌、酵母菌计数。5.2.2.2成份（g/L）：蛋白胨5.0葡萄糖10.0磷酸二氢钾1.0硫酸镁0.5孟

6、加拉红0.03氯霉菌0.1琼脂15.05.2.2.3制法:称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121℃20min高压灭菌备用。5.2.2.4注意事项：保存于阴凉干燥处；密封、避光。5.2.3乳糖胆盐发酵管5.2.3.1用途：用于大肠菌群，粪大肠菌群及大肠杆菌的测定。5.2.3.2成份（g/L）：蛋白胨20.0胆盐3.0乳糖5.0溴甲酚紫0.01PH7.4±0.15.2.3.3制法:称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，115℃15min高压灭菌，双料乳糖胆盐

7、发酵管除纯水外，其它成份加倍。5.2.3.4注意事项：密封保存于阴凉干燥处。5.2.4乳糖复发酵管5.2.4.1用途：供大肠菌群证实试验用。5.2.4.2成份（g/L）：蛋白胨20.0乳糖10.0溴甲酚紫0.01PH7.4±0.15.2.4.3制法:称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装10ml于有倒立发酵管的试管中，115℃15min高压灭菌备用。5.2.4.4注意事项：密封保存于阴凉干燥处。5.2.5三糖铁琼脂5.2.5.1用途：主要用于肠杆菌科细菌的生化反应筛选。5.2.5.2成份（g/

8、L）：蛋白胨20.0酚红0.025牛肉膏3.0氯化钠5.0乳糖10.0硫酸亚铁铵(6H2O)0.5蔗糖10.0硫代硫酸钠0.5琼脂12.0葡萄糖1.0PH7.4±0.15.2.5.3制法:称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至溶解，分装试管，115℃15min高压灭菌制成高层斜面备用。5.2.5.4注意事项：保存于阴凉干燥处，密封、避光。5.2.6伊红美兰琼脂5.2.6.1用途：弱选择性培养基，用于分离肠道致病菌。5.2.6.2成份（g/L）：蛋白胨10.0乳