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《GBT4789.28-1994-食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验GB4789.28-94染色法、培养基和试剂代替GB4789.28-84MicrobiologicalexaminationoffoodhygieneStainningmethods,culturemediumsandreagents━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━1主题内容与适用范围本标准规定了各种染色法、培养基和试剂。本标准适用于食品和食物中毒样品中各类微生物的检验。2染色液配制及染色法2.1美蓝染色法2.1.1
2、吕氏碱性美蓝染色液美蓝0.3g95％乙醇30mL0.01％氢氧化钾溶液100mL将美蓝溶解于乙醇中,然后与氢氧化钾溶液混合。2.1.2染色法将涂片在火焰上固定,待冷。滴加染液,染1～3min,水洗,待干,镜检。2.1.3结果菌体呈蓝色。2.2革兰氏染色法2.2.1结晶紫染色液结晶紫1g95％乙醇20mL1％草酸铵水溶液80mL将结晶紫溶解于乙醇中,然后与草酸铵溶液混合。2.2.2革兰氏碘液磺1g碘化钾2g蒸馏水300mL将碘与碘化钾先进行混合,加入蒸馏水少许,充分振摇,待完全溶解后,再加蒸馏水至300m
3、L。2.2.3沙黄复染液沙黄0.25g95％乙醇10mL蒸馏水90mL将沙黄溶解于乙醇中,然后用蒸馏水稀释。2.2.4染色法2.2.4.1将涂片在火焰上固定,滴加结晶紫染色液,染1min,水洗。2.2.4.2滴加革兰氏碘液,作用1min,水洗。2.2.4.3滴加95％乙醇脱色,约30s；或将乙醇滴满整个涂片,立即倾去,再用乙醇滴满整个涂片,脱色10s。2.2.4.4水洗,滴加复染液,复染1min。水洗,待干,镜检。2.2.5结果革兰氏阳性菌呈紫色。革兰氏阴性菌呈红色。注：亦可用1∶10稀释石炭酸复红染色
4、液作复染液,复染时间仅需10s。2.3耐酸性染色法(萋－倪二氏法)2.3.1石炭酸品红染色液碱性品红0.3g95％乙醇10mL5％酚水溶液90mL将品红溶解于乙醇中,然后与酚溶液混合。2.3.23％盐酸－乙醇浓盐酸3mL95％乙醇97mL2.3.3复染液吕氏碱性美蓝染色液。2.3.4染色法2.3.4.1将涂片在火焰上加热固定,滴加石炭酸品红染色液,徐徐加热至有蒸气出现,但切不可使沸腾。染液如因蒸发减少时,应随时添加。染5min,倾去染液,水洗。2.3.4.2滴加盐酸－乙醇脱色,直至无红色脱落为止(所需时
5、间视涂片厚薄而定,一般为1～3min),水洗。2.3.4.3滴加吕氏碱性美蓝染色液,复染30s～1min,水洗,待干,镜检。2.3.5结果：耐酸性细菌呈红色,其他细菌、细胞等物质呈蓝色。2.4柯氏染色法2.4.1染色液2.4.1.10.5％沙黄液。2.4.1.20.5％孔雀绿液。2.4.2染色法2.4.2.1将涂片在火焰上固定,滴加0.5％沙黄液,并加热至出现气泡,约2～3min,水洗。2.4.2.2滴加0.5％孔雀绿液,复染40～50s。水洗,待干,镜检。2.4.3结果布氏杆菌呈红色,其他细菌及细胞呈
6、绿色。2.5奥尔特氏荚膜染色法2.5.1染色液沙黄3g蒸馏水100mL用乳钵研磨溶解。2.5.2染色法将涂片在火焰上固定,滴加染色液,并加热至产生蒸气后,继续染3min。水洗,待干,镜检。2.5.3结果炭疽芽胞杆菌菌体呈赤褐色,荚膜呈黄色。2.6瑞氏染色法2.6.1染色液瑞氏色素0.1g甲醇60mL用乳钵研磨溶解。2.6.2染色法2.6.2.1涂片待自然干燥后,滴加染色液,固定1min。2.6.2.2加入等量蒸馏水(pH6.5),染色3～5min。2.6.2.3用蒸馏水冲洗,待干,镜检。2.7鞭毛染色法
7、2.7.1染色液的配制2.7.1.1甲液：称丹宁酸5g、氯化高铁(FeCl3)1.5g,溶于100mL蒸馏水中,待溶解后加入1％的氢氧化钠溶液1mL和15％的甲醛溶液2mL。2.7.1.2乙液：称2g硝酸银溶于100mL蒸馏水中。在90mL乙液中滴加浓氢氧化铵溶液,到出现沉淀后,再滴加使其变为澄清,然后用其余10mL乙液小心滴加至澄清液中,至出现轻微雾状为止(此为关键性操作,应特别小心)。滴加氢氧化铵和用剩余乙液回滴时,要边滴边充分摇荡,染液当天配,当天使用,2～3d基本无效。2.7.2染色法在风干的载
8、玻片上滴加甲液,4～6min后,用蒸馏水轻轻冲净。再加乙液,缓缓加热至冒汽,维持约半分钟(加热时注意勿使出现干燥面)。在菌体多的部位可呈深褐色到黑色,停止加热,用水冲净,干后镜检,菌体及鞭毛为深褐色到黑色。2.8碱性复红染色法将0.5g碱性复红染料溶解于20mL95％乙醇中,然后用蒸馏水稀释至100mL。如有不溶物时,可用滤纸过滤,或静置后取上清液备用。注：本染色液系用于苏云金芽胞内蛋白质毒素结晶的染色,藉以与蜡样芽胞杆菌相区别。3生化试验
