GB 4789.14-1994 食品卫生微生物学检验 蜡样芽胞杆菌检验

《GB 4789.14-1994 食品卫生微生物学检验 蜡样芽胞杆菌检验 》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验GB4789.14一94蜡样芽胞杆菌检验代替GB4789.14--84MicrobiologicalexaminationoffoodhygieneExaminationofBacilluscereus1主题内容与适用范围本标准规定了蜡样芽胞杆菌的检验方法。本标准适用于食品和食物中毒样品中蜡样芽胞杆菌的检验。2引用标准GB4789.2食品卫生微生物学检验菌落总数测定GB4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材料3.1温箱:36士10C,3.2普通冰箱。3.3显微镜。3.4恒温水浴46士10C。3.5天平。3.6电炉。3.7吸管

2、:1mL,10mLa3.8载玻片。3.9均质器或乳钵。3.10L型涂布棒。3.11灭菌刀，剪，镊子。3.12三角瓶:容量500mL,培养墓和试荆4.1肉浸液肉汤培养基:GB4789.28中4.1.酪蛋白琼脂培养基;GB4789.28中4.65.:.;动力一硝酸盐培养基:GB4789.28中4.72,月月乌﹃.缓冲葡萄糖蛋白陈水:GB4789.28中3.4.J叹q…d血琼脂培养基:GB4789.28中4.6.月l卜叼U3%过氧化氢溶液。.7q夕甲蔡胺一乙酸溶液。中华人民共和国卫生郎1994一03一18批准1994一09一01实施GB4789.14一944.8对氨基笨磺酸一乙酸溶液。4.9革兰氏

3、染色液:GB4789.28中2.204.10甘露醇卵黄多粘菌素(MYP)琼脂培养基:GB4789.28中4.64.4.11o.530碱性复红染色液:GB4789.28中2.8,4.12木糖一明胶培养基;GB4789.28中4.66.5检验程序蜡样芽胞杆菌检验程序如下:6操作步骏6.1菌数测定以无菌操作将检样25g(mL)(按GB4789.2测定)，用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液做成10-1-10-5的稀释液。取各稀释液0.1mL，接种在两个选择性培养基—甘露醇卵黄多粘菌素(MYP)琼脂培养基上，用I形棒涂布于整个表面，置36士10C温箱培养1220h后选取适当菌落数的平板进行计数，蜡样芽胞杆菌

4、在此培养基上的菌落为粉红色(表示不发酵甘露醇)，周围有粉红色的晕(表示产生卵磷脂酶)。计算后，从中挑取5个此种菌落做证实试验。根据证实为蜡样芽胞杆菌的菌落数计算出该平板上的菌落数，然后乘其稀释倍数，即得每克(或毫升)样品中所含蜡样芽胞杆菌数，例如MYP平板的可疑菌落为25个，取5个鉴定，证实为4个，乘上稀释倍数(如10")，再乘上1g(或mL)检样数(取的是。.1mL样)则为:25X4/5X104X10三2X1066.2分离培养取检样或稀释液划线分离培养于选择性培养基(MYP)上，置37℃培养1220h，挑取可疑的蜡样芽胞杆菌菌落(见6.1)接种于肉汤和营养琼脂做成纯培养，然后做证实试验。6

5、.3证实试验GB4789.14一P6.3.1形态观察本菌为革兰氏阳性大杆菌，宽度在11em或1(am以上，芽胞呈卵圆形，不突出菌体，多位于菌体中央或稍偏于一端。6.3.2培养特性本菌在肉汤中生长混浊，常微有菌膜或壁环，振播易乳化;在普通琼脂平板上生成的菌落不透明、表面粗糙、似毛玻璃状或融蜡状，边缘不齐。6.3.3生化性状及生化分型6.3.3.1生化性状本菌有动力;能产生卵磷脂酶和酪蛋白酶，过氧化氢酶试验阳性，溶血;不发酵甘露醇和木糖;常能液化明胶和使硝酸盐还原;在厌氧条件下能发酵葡萄糖。6.3-3.2生化分型蜡样芽胞杆菌可根据对柠檬酸盐利用、硝酸盐还原、淀粉水解、V-P反应、明胶液化性状的试

6、验，将该菌分成不同的型别，见表1,表1蜡样芽胞杆菌生化分型生化试验型别柠檬酸盐利用硝酸盐还原淀粉水解V-P反应明胶液化1+++++2++++3++++4+++5++6++++7+++8+++9++10+++11++++12+++13+14++15+++6.3.4与类似菌鉴别本菌与其他类似菌的鉴别见表2,表2蜡样芽胞杆菌与其他类似菌的鉴别}__一项目巨大芽胞杆菌蜡样芽胞杆菌苏云金芽胞杆菌草状芽胞杆苗炭疽芽胞杆菌过氧化氢醉+++++动力士士士硝酸盐还原+十+斗GB4789.14一94续表艺项目巨大芽胞杆菌蜡样芽胞杆菌}苏云金芽胞杆菌}革状芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌+士士干酪蛋白分解十十+十卵黄反应+葡

7、萄精利用(厌氧)甘露醉+木糖十溶血对昆虫致病已知致病菌恃性产生肠毒素假根样生长f对动物和人致病的内毒素结晶注+s0%-100%的菌株阳性;-s0写-100%的菌株阴性，士大多数菌株阳性;平大多数菌株阴性本菌在生化性状上与苏云菌芽胞杆菌极为相似，但后者可籍细胞内产生蛋白质毒素结晶加以鉴别。其检查方法如下:取营养琼脂上纯培养物少许，加少量蒸馏水涂于玻片上，待自然干燥后用弱火焰固定，加甲醇于玻片上，半分钟后倾去甲醇