GBT4789.14-2003食品卫生微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验

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1、GB/T4789.14-2003前言本标准对GB/T4789.14-1994《食品卫生微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验))进行修订。本标准与GB/T4789.14-1994相比主要修改如下:—按照GB/T1.1-200。对标准文本的格式和文字进行修改。—修改并规范原标准中的“设备和材料”。本标准自实施之日起，GB/T4789.14-1994同时废止。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位:中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。本标准主要起草人:白竟玉、付萍、杨宝兰、姚景会。本标准于1984年首次发布，1994年第一次修订，本次为第二次修订。GB

2、/T4789.14-2003食品卫生微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验范围本标准规定了蜡样芽胞杆菌的检验方法。本标准适用于各类食品和食物中毒样品中蜡样芽胞杆菌的检验。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T4789.2食品卫生微生物学检验菌落总数测定GB/T4789.28-2003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和

3、材料3.1冰箱:00C-40C,3.2恒温培养箱:36℃士10C。3.3恒温水浴锅:46℃士10C。3.4显微镜:lox一loox。3.5均质器或灭菌乳钵。3.6架盘药物天平:0g-500g,精确至。.5g,3.7灭菌锥形瓶:500mL,3.8灭菌试管:16mmX160mm,3.9灭菌吸管:1mL(具0.01mL刻度),10mL(具0.1mL刻度)。3.10灭菌平培养皿:直径90mm,3.11灭菌刀、剪、镊子等。4培养墓和试荆4.1肉浸液肉汤培养基:GB/T4789.28-2003中4.1.4.2酪蛋白琼脂培养基:GB/T4789.28-2003中4.65

4、,4.3动力一硝酸盐培养基:GB/T4789.28-2003中4.72,4.4缓冲葡萄糖蛋白陈水:GB/T4789.28-2003中3.4.4.5血琼脂培养基:GB/T4789.28-2003中4.6.4.63%过氧化氢溶液。4.7甲蔡胺一乙酸溶液:GB/T4789.28-2003中3.17.4.8对氨基苯磺酸一乙酸溶液:GB/T4789.28-2003中3.17,4.9革兰氏染色液:GB/T4789.28-2003中2.2,4.10甘露醇卵黄多粘菌素(MYP)琼脂培养基:GB/T4789.28-2003中4.64.4.110.5写碱性复红染色液:GB/T

5、4789.28-2003中2.8.GB/T4789.14-20034.12木糖一明胶培养基:GB/T4789.28-2003中4.66.5检验程序蜡样芽胞杆菌检验程序见图1,图16操作步骤6.1菌数测定以无菌操作将检样25g(mL)，用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液做成10-1-10-1的稀释液按GB/T4789.2测定。取各稀释液。.1mL，接种在两个选择性培养基一甘露醇卵黄多粘菌素(MYP)琼脂培养基上，用L形棒涂布于整个表面，置36℃士1℃培养12h-20h,选取适当菌落数的平板进行计数，蜡样芽胞杆菌在此培养基上的菌落为粉红色(表示不发酵甘露醇)周围有粉

6、红色的晕(表示产生卵磷脂酶)。计数后，从中挑取五个此种菌落做证实试验，根据证实的蜡样芽胞杆菌的菌落数计算出该平板上的菌落数，然后乘其稀释倍数，即得每克(毫升)样品中所含蜡样芽胞杆菌数。例如:将0.1mL10-0样品稀释液涂布于MYP平板上，其可疑菌落为25个，取五个鉴定，证实四个菌落为蜡样芽胞杆菌，则1g(mL)检样中所含蜡样芽胞杆菌数为:25X4/5X100X10=2X10`6.2分离培养取检样或稀释液划线分离于选择性培养基(MYP)上，置370C培养12h-20h，挑取可疑的蜡样芽胞杆菌菌落(见6.1)接种于肉汤和营养琼脂做成纯培养，然后做证实试验。6

7、.3证实试验6.3.1形态观察本菌为革兰氏阳性大杆菌，宽度在1um或1tm以上，芽胞呈卵圆形，不突出菌体，多位于菌体中98GB/T4789.14-2003央或稍偏于一端。6.3.2培养特性本菌在肉汤中生长混浊，常微有菌膜或壁环，振摇易乳化;在普通琼脂平板上其菌落不透明、表面粗糙、似毛玻璃状或融蜡状，边缘不整齐。6.3.3生化性状及生化分型6.3.3.生化性状本菌有动力;能产生卵磷脂酶和酪蛋白酶;过氧氢酶试验阳性;溶血;不发酵甘露醇和木糖;常能液化明胶和使硝酸盐还原;在厌氧条件下能发酵葡萄糖。6.3.3.2生化分型根据蜡样芽胞杆菌对柠檬酸盐利用、硝酸盐还原、

8、淀粉水解、V-P反应、明胶液化性状的试验，分成不同型别，见表1.表