蜡样芽胞杆菌检测.ppt

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1、蜡样芽胞杆菌检测Bacilluscereusexamination浙江省疾病预防控制中心梅玲玲蜡样芽胞杆菌(Bacilluscereus)芽胞杆菌属（Bacillus）在自然界分布广泛，常存在于土壤、灰尘和污水中，植物和许多食品中常见已从多种食品中分离出该菌，包括肉、乳制品、蔬菜、鱼、酱油、布丁、米饭及各种甜点。1950年首次在挪威明确报告其致病作用。在国内，于1973年首次报告了南京某托儿所儿童因进食泡饭引起呕吐型蜡样芽胞杆菌食物中毒后，至今除西藏外，每个省、自治区、直辖市已经都有报，有些地区甚至占细菌性食物中毒的首位。蜡样

2、芽胞杆菌食物中毒特征以夏季（6-10月）为主致病因子为细菌繁殖过程中产生的细菌毒素中毒食品含菌量在106CFU/g(ml)以上引起中毒的原因常为食品食前保存温度不当，放置时间较长或食品加热不当引起食物中毒的主要食物种类美国炒米饭欧洲甜点、肉饼、色拉、奶和肉制品中国米饭、淀粉类制品临床表现“腹泻型”：潜伏期为8h～16h，主要症状为水泻、腹痛、腹痉挛为主，病程约24h。“呕吐型”：潜伏期为0.5h～5h，症状以恶心、呕吐为主，病程不超过24h。引起食物中毒的原因－肠毒素腹泻毒素：为大分子量蛋白质，引发腹泻型综合症,能在各种食物中

3、形成;呕吐毒素：为小分子量、热稳定多肽，100℃30min不能被破坏，为引起呕吐型中毒的致病因素，常在米饭中形成。新国标编制说明背景现行标准不足处重新修订的意义新国标编制说明第一版标准：《食品卫生微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验》（GB/T4789.14-1984）该标准的颁布为蜡样芽胞杆菌的规范检测，为蜡样芽胞杆菌病的监测、预防、控制起到了重要的作用。背景在以后的二十年时间里，食品中蜡样芽胞杆菌检测标准经过1994年、2003年二次修订，但内容可以说完全与1984年版相同。现行GB/T4789.14-2003标准不足处1.对蜡样

4、芽胞杆菌含量少于1000cfu/g的样品计数效果差。2.采用的36℃±1℃培养温度并非是蜡样芽胞杆菌最适生长条件。3.检验结果与现行的其它国家的标准存在一定差异。重新修订的意义提高检出率扩大检测范围与国际接轨适用性和可操作性提高检出率蜡样芽胞杆菌的最佳生长温度为30～32℃。经标准修订协作组验证：蜡样芽胞杆菌在MYP培养基的培养条件以30℃±1℃培养48h的生长率最高，平均生长率达到了93.69%。其次为30℃±1℃培养24h，平均生长率为92.28%。生长率最低的培养条件为36℃±1℃培养24h。平均生长率为82.32%。提

5、高检出率经统计学分析，30℃±1℃培养温度的生长率显著高于36℃±1℃(P﹤0.05），但在培养温度相同的情况下，培育时间24h和48h蜡样芽胞杆菌生长率无显著差异（P﹥0.05）。表1MYP培养条件选择结果比对单位菌量（cfu/皿）MYP平板计数结果30℃±1℃24h30℃±1℃48h36℃±1℃24h36℃±1℃48h计数结果cfu/皿生长率（%）计数结果cfu/皿生长率（%）计数结果cfu/皿生长率（%）计数结果cfu/皿生长率（%）吉林省CDC8688102.3388102.336474.426474.42湖北省CDC

6、4048120.0048120.0045112.5045112.50江苏省CDC672537.312638.815074.635074.63浙江省CDC17073104.2873104.286491.436491.43广东微生物研究所5981137.2988149.1561103.3871120.34浙江省CDC2916571.425964.845964.845054.95浙江省CDC33437108.8237108.822573.532573.53平均值63.8659.5792.2859.8693.6952.5782.325

7、2.7182.54扩大检测范围增加了MPN法以弥补样品中蜡样芽胞杆菌带菌量少于103cfu/mL时用平板计数法计数不准的问题美国FDA、ISO、以及SN0176-92标准除采用平板计数外，还采用了MPN法该方法操作与现行大肠菌群的操作类似，容易推广使用。便于与国际接轨增加了根状生长试验和溶菌酶试验。提高方法的适用性和可操作性描述具体化,提高方法的可操作性样品处理和制备等与其它标准匹配，提高方法的适用性考虑我国的实际情况，保持与原标准的连续性新标准与GB/T4789.14-2003相比主要修改如下:——修改了标准名称；——增加了

8、“第二法蜡样芽胞杆菌MPN计数法”；——将选择性分离培养基（MYP）培养条件由37℃培养12h-20h改为30℃±1℃培养24h-48h；——增加了根状生长试验和溶菌酶试验；——增加了典型菌落计数和确认；——增加了附录A、附录B。食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌