GB 4789.14-2014 食品安全国家标准 食品微生物学检验 蜡样芽胞杆菌检验

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1、中华人民共和国国家标准GB4789.14—2014食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验（）2014-12-01发布2015-05-01实施GB4789.14—2014前言本标准代替GB/T4789.14-2003《食品卫生微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验》。本标准与GB/T4789.14-2003相比，主要变化如下：——修改了标准的中文名称；——增加了第二法蜡样芽胞杆菌MPN计数法；——将选择性分离培养基（MYP）培养条件由37℃培养12h～20h改为30℃±1℃培养24h～48h；——增加了溶菌酶试验；——修改了操作步骤；—

2、—增加了附录A、附录B。IGB4789.14—2014食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验1范围本标准规定了食品中蜡样芽胞杆菌（Bacilluscereus）的检验方法。本标准第一法适用于蜡样芽胞杆菌含量较高的食品中蜡样芽胞杆菌的计数；第二法适用于蜡样芽胞杆菌含量较低的食品样品中蜡样芽胞杆菌的计数。2设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：a)冰箱：2℃～5℃；b)恒温培养箱：30℃±1℃、36℃±1℃；c)均质器；d)电子天平：感量0.1g；e)无菌锥形瓶：100mL、500mL；f)无菌吸管：

3、1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头；g)无菌平皿：直径90mm；h)无菌试管：18mm×180mm；i)显微镜：10倍～100倍（油镜）；j)L涂布棒。3培养基和试剂3.1磷酸盐缓冲液（PBS）：见附录A中A.1。3.2甘露醇卵黄多黏菌素（MYP）琼脂：见附录A中A.2。3.3胰酪胨大豆多黏菌素肉汤：见附录A中A.3。3.4营养琼脂：见附录A中A.4。3.5过氧化氢溶液：见附录A中A.5。3.6动力培养基：见附录A中A.6。3.7硝酸盐肉汤：见附录A中A.7。3.8酪蛋白琼脂：见附录A中A.8

4、。3.9硫酸锰营养琼脂培养基：见附录A中A.9。3.100.5%碱性复红：见附录A中A.10。3.11动力培养基：见附录A中A.11。3.12糖发酵管：见附录A中A.12。3.13V-P培养基：见附录A中A.13。3.14胰酪胨大豆羊血（TSSB）琼脂：见附录A中A.14。3.15溶菌酶营养肉汤：见附录A中A.15。3.16西蒙氏柠檬酸盐培养基：见附录A中A.16。3.17明胶培养基：见附录A中A.17。1GB4789.14—20144蜡样芽胞杆菌平板计数法（第一法）4.1检验程序蜡样芽胞杆菌平板计数法检验程序见图1。图1蜡样芽胞杆菌

5、平板计数法检样检验程序25g(或25mL)样品+225mL稀释液，均质10倍系列稀释选取2个～3个适宜的连续稀释度的样品匀液，涂布MYP琼脂平板30℃±1℃24h～48h典型菌落计数及确定鉴定报告图1蜡样芽胞杆菌平板计数法检验程序4.2操作步骤4.2.1样品处理冷冻样品应在45℃以下不超过15min或在2℃～5℃不超过18h解冻，若不能及时检验，应放于-10℃~-20℃保存；非冷冻而易腐的样品应尽可能及时检验，若不能及时检验，应置于2℃～5℃冰箱保存，24h内检验。4.2.2样品制备称取样品25g，放入盛有225mLPBS或生理盐水的

6、无菌均质杯内，用旋转刀片式均质器以8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或放入盛有225mLPBS或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min。若样品为液态，吸取25mL样品至盛有225mLPBS或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀，作为1:10的样品匀液。4.2.3样品的稀释吸取4.2.2中1:10的样品匀液1mL加到装有9mLPBS或生理盐水的稀释管中，充分混匀制成1:100的样品匀液。跟据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液

7、。每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管或吸头。2GB4789.14—20144.2.4样品接种根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），以0.3mL、0.3mL、0.4mL接种量分别移入三块MYP琼脂平板，然后用无菌L棒涂布整个平板，注意不要触及平板边缘。使用前，如MYP琼脂平板表面有水珠，可放在25℃～50℃的培养箱里干燥，直到平板表面的水珠消失。4.2.5分离、培养4.2.5.1分离在通常情况下，涂布后，将平板静置10min。如样液不易吸收，可将平板放在培养箱30℃±1℃培养1h，等样品

8、匀液吸收后翻转平皿，倒置于培养箱，30℃±1℃培养24h±2h。如果菌落不典型，可继续培养24h±2h再观察。在MYP琼脂平板上，典型菌落为微粉红色(表示不发酵甘露醇)，周围有白色至淡粉红色沉淀环（表示产卵磷脂酶）。4.