DB37T 2617-2014 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 高效液相色谱法

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1、ICS65.120B46DB37山东省地方标准DB37/T2617—2014饲料中黄曲霉毒素B1的测定高效液相色谱法2014-10-13发布2014-11-10实施山东省质量技术监督局发布DB37/T2617—2014前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由山东省农业厅提出。本标准由山东省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所。本标准主要起草人：滕葳、赵善仓、张树秋、郭长英、邓立刚、李增梅、王磊、柳琪、赵玉华。IDB37/T2617—2014饲料中黄曲霉毒素B1的测定高效液相色谱法1范围本标准规定

2、了饲料中黄曲霉毒素B1的高效液相色谱检测法。本标准适用于饲料中黄曲霉毒素B1的测定。本方法检测限为5µg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规则和试验方法3原理样品中黄曲霉毒素经溶液提取，黄曲霉毒素免疫亲和柱净化，供高效液相色谱（带荧光检测器）测定。4试剂与材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂。本标准所述溶液如未指明溶剂，均指水溶液。4.1水，GB/T6682，一级。4.2甲醇：

3、色谱纯。4.3乙腈：色谱纯。4.4氯化钠。4.5甲醇+水（7+3）溶液：取70mL甲醇加30mL水。4.6柱后衍生液（0.05%碘溶液）：称0.1g碘，溶解于20mL甲醇，加水定容至200mL，过0.45µm滤膜，4℃避光保存。4.7黄曲霉毒素B1标准品：纯度≥99%。4.8黄曲霉毒素B1标准储备液：用甲醇配制成1µg/mL的标准储备液，于-4℃保存。4.9黄曲霉毒素B1标准工作液：准确移取适量储备液，用甲醇稀释成一系列标准工作液，现用现配。4.10免疫亲和柱：免疫亲和柱应含有黄曲霉毒素B1的抗体。亲和柱的最大容量不小于100ng黄曲霉毒素B1。4.11滤膜：0.4

4、5µm滤膜。5仪器与设备5.1高效液相色谱仪，带荧光检测器和柱后衍生系统。1DB37/T2617—20145.2天平：感量0.01g。5.3高速均质机。5.4玻璃纤维滤纸。5.5漩涡混合器。5.6三角瓶：200mL。5.7玻璃注射器：10.0mL。5.8空气压力泵。5.9玻璃试管：直径12mm，长75mm，无荧光特征。6试样的制备将饲料样品用粉碎机粉碎，过0.85mm筛。7测定步骤7.1提取称取15g（准确至0.01g）样品于200mL三角瓶（5.6）中，加入5g氯化纳（4.3），再加入甲醇+水溶液（4.4）75mL，用均质机高速搅拌提取1min，定量滤纸过滤。准确

5、移取10.0mL滤液，再加入20.0mL水稀释，摇匀，用玻璃纤维滤纸过滤，待净化。7.2净化将免疫亲和柱（4.9）连接于10.0mL玻璃注射器（5.7）下。准确移取10.0mL稀释后提取液注入注射器中，调节空气压力泵（5.8），控制试样以2mL/min～3mL/min稳定的流速过柱，然后取10mL水淋洗亲和柱，弃去全部流出液，并使2mL～3mL空气通过柱体。准确加入1.0mL甲醇（4.1）洗脱，流速为1mL/min～2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管（5.9）中。用流动相定容至2mL，于漩涡混合器（5.5）上震荡1min，过0.45µm滤膜。供液相色谱测定。7

6、.3测定条件7.3.1液相色谱参考条件参考条件如下：a)色谱柱：C18色谱柱(4.6×250mm，5μm)，或相当者；b)激发波长：360nm，发射波长：430nm；c)流动相：水：甲醇：乙腈=56：22：22；d)柱温：35℃；e)流速：0.7mL/min；f)进样量：10µL；g)柱后衍生液：0.05%碘液；h)衍生液流速：0.3mL/min；i)反应管温度：70℃。7.3.2样品测定按上述仪器条件，根据保留时间定性，外标法定量。黄曲霉毒素B1标准品色谱图见图1。2DB37/T2617—201415.008.58610.00Fluorescence5.000.0

7、02.004.006.008.0010.0012.0014.00Minutes图1黄曲霉毒素B1标准品色谱图8结果计算按式（1）计算样品中黄曲霉毒素B1残留量，数值以毫克每千克（mg/kg）表示：Cs×A×V45ω=×.................................(1)m×As2式中：ω——样品中黄曲霉毒素B1残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；Cs——标准溶液中相应黄曲霉毒素B1色谱峰的浓度，单位为微克每毫升（µg/mL）；A——试样溶液中相应黄曲霉毒素B1的峰面积；As——标准溶液中相应黄曲霉毒素的峰面积；V——洗脱所用甲醇的总体积，