DB34T 1421-2011 水产品中孔雀石绿及其代谢物残留量的快速筛选测定 酶联免疫法

《DB34T 1421-2011 水产品中孔雀石绿及其代谢物残留量的快速筛选测定 酶联免疫法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、ICS67.120.30B50DB34安徽省地方标准DB34/T1421—2011水产品中孔雀石绿及其代谢物残留量的快速筛选测定-酶联免疫吸附法QuickScreeningofresiduesofmalachitegreenanditsmetaboliteinaquaticproductsELISA2011-05-10发布2011-06-10实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T1421—2011前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省渔业环境监测中心提出。本标准由安徽省质量技术监

2、督局批准。本标准起草单位：安徽省渔业环境监测中心。本标准主要起草人：孙德祥、鲍鸣、周作友、董星宇、杨瑞、程金明。IDB34/T1421—2011水产品中孔雀石绿及其代谢物残留量的快速筛选测定-酶联免疫吸附法1范围本标准规定了水产品中孔雀石绿（Malachitegreen，MG）及其代谢物隐色孔雀石绿（Leucomalachitegreen，LMG）残留总量的酶联免疫吸附（ELISA）检测方法。本标准适用于水产品中孔雀石绿及其代谢物隐色孔雀石绿的快速筛选测定。阳性样品须用液相色谱-串联质谱法（LC/MS-MS）确

3、证。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SC/T3016-2004水产品抽样方法3原理本方法基于竞争性酶联免疫方法原理。样品中MG或LMG经提取液和乙腈等提取纯化后，LMG通过氧化剂被氧化为MG，与MG-生物素竞争微孔板上包被的MG抗体，没有结合的MG-生物素在洗板中被去除。再加入过量的酶标记的链亲和素，与结合了抗体的MG-生物素结

4、合，多余的酶标记的链亲和素在洗板中被去除。结合的酶使随后加入的HRP底物(TMB)显色，样品中MG和LMG含量越少，则结合的酶越多，颜色则越深，反之，颜色则越浅。结果用酶标仪在波长450nm处，测定吸光度值，在一定浓度范围内吸光度值与样品中MG和LMG含量成反比。4试剂和材料4.1实验室用试剂：所用试剂除另有规定外，均为分析纯。水为符合GB/T6682规定的二级水。4.2乙腈。4.3正己烷。4.4孔雀石绿标准溶液：0ng/mL、0.05ng/mL、0.15ng/mL、0.5ng/mL、1.5ng/mL、4.5n

5、g/mL。4.5孔雀石绿酶联免疫试剂盒应在有效期内。超过1个月不使用，生物素耦合物、辣根过氧化物酶标记的链亲和素以及标准品应保存在-20℃。其它试剂应在2℃～8℃的温度下贮存。不同批次的试剂盒不可混用。4.5.1微孔板：包被有孔雀石绿抗体。4.5.2提取液A：使用前，取出提取物A，用90mL双蒸馏水溶解至完全溶解。4.5.3提取液B：使用前，根据需要量，用双蒸馏水稀释10倍。1DB34/T1421—20114.5.4纯化试剂。4.5.5氧化剂液：使用前，根据需要量，用乙腈稀释10倍。4.5.6提取液C：使用前，

6、根据需要量，用双蒸馏水稀释10倍。4.5.7MG-生物素耦合物稀释液。4.5.8MG-生物素耦合物：使用前5min按需要量，用MG-生物素耦合物稀释液（4.3.7）稀释100倍。4.5.9辣根过氧化物酶标记的链亲和素稀释液。4.5.10辣根过氧化物酶标记的链亲和素：使用前10min按需要量，用辣根过氧化物酶标记的链亲和素稀释液（4.3.9）稀释100倍。4.5.11洗液。使用前10min，用双蒸馏水稀释20倍。4.5.12TMB底物。4.5.13终止液。5仪器和设备5.1酶标仪：配备450nm滤光片。5.2分析

7、天平：感量0.001g，感量0.0001g。5.3恒温培养箱。5.4均质器。5.5旋涡振荡器。5.6离心机：离心力≥4000g。5.7氮吹仪5.8微量单道/多道移液器：10μL～100μL；100μL～1000μL；50μL～300μL。5.9水浴锅。5.10聚四氟乙烯离心管：5mL，50mL，具塞。6测定方法6.1制备与保存6.1.1抽样：按SC/T3016-2004水产品抽样方法。6.1.2食用样品取可食部分，匀质到粉碎均匀（糊状），装入干净容器，标明标记，-20℃保存。6.1.3苗种样品直接匀质到粉碎均匀

8、（糊状），装入干净容器，标明标记，-20℃保存。6.2提取与纯化6.2.1操作之前将试剂盒中所有试剂在室温（20℃～25℃）下放置1h～2h。6.2.2称取2.00g（±0.0001g）匀质好的样品于50mL离心管内，依次加入1.0mL样品提取液A（4.3.2）、0.4mL样品提取液B（4.3.3）和6.0mL乙腈，涡旋振荡4min或者振摇20min。4000g离心10min，取2.0