《水产品中孔雀石绿及其代谢物残留快速测定-胶体金免疫层析法》编制说明

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1、ICs67.050B50DB61陕西省地方标准水产品中孔雀石绿及其代谢物残留快速测定-胶体金免疫层析法DeterminationofMalachitegreenandthecorrespondingmetabolitesinaquaticproducts-colloidalgoldimmunochromatography（编制说明）发布一、任务来源、起草单位、协作单位、起草人任务来源：陕西省质量技术监督局任务编号：SDBXM128-2018起草单位：陕西省水产研究所、农业农村部渔业环境及水产品质量监

2、督检验测试中心（西安）、无锡中德伯尔生物技术有限公司、国家水产品质量监督检验中心、西安市食品药品监督检验所。起草人：杨元昊，李毅，杨娟宁，周丽，李峰钢。二、标准制定的背景及意义孔雀石绿(Malachitegreen,MG)是一种人工合成的三苯甲烷类有机物，因具有良好的杀虫、杀菌作用而被应用于水产养殖业，预防、治疗鱼类及鱼卵的寄生虫、真菌和细菌感染。但MG具有强烈的毒性和“三致”作用，在水生动物体内通常会迅速代谢生成毒性更强的隐色孔雀石绿(LMG)。MG与LMG均能相对稳定地残留在水产品的脂肪组织中，

3、并通过食物链对人身健康造成危害。欧盟法案2002/675/EC中规定，动物源性食品中MG和LMG残留总量不得高于2μg/kg。日本肯定列表中明确规定在进口水产品中不得检出MG。我国也已于2002年规定严禁MG用于水产养殖业，在动物源性食品中不得检出。但由于MG杀菌效果显著且廉价易得，违规使用MG的现象仍然屡禁不止。自2006年多地爆出多宝鱼中含有MG等禁用渔药残留之后，全国各地迅速开展了关于水产养殖用药的监督检测工作，结果发现我国在水产养殖过程中普遍存在滥用抗生素和非法使用禁用药物的现象，尤其是水产

4、品中MG等禁用药物的检出率很高，已经严重威胁到消费者的身体健康。目前已报道的MG检测方法主要有：色谱及其联用技术拉曼光谱检测法、酶联免疫法、电化学检测法、紫外光谱法等在上述检测方法中，HPLC和LC-MS作为检测MG与LMG含量公认的“金标准”，也是我国国标中规定的法检方法。如GB/T19857-2005《水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定》中就分别规定了液相色谱-串联质谱和高效液相色谱两种方法，检测限分别达到0.5μg/kg和2.0μg/kg；而在GB/T20361-2006《水产品中孔雀石绿和

5、结晶紫残留量的测定高效液相色谱荧光检测法》中规定的检测限为0.5μg/kg。除此之外还有多项地方标准也均采用了HPLC和LC-MS方法。HPLC和LC-MS法具有精确度高、应用范围广、不易出现假阴假阳等优点，但是仪器昂贵、检测成本高、样品前处理复杂且耗时、对测试人员要求高等缺陷将其局限在实验室内，无法满足快检需求。表面增强拉曼法（SERS）在理论上不需对样品进行预处理，也不需要制备样品，一定程度上减少了误差的产生，另外该方法具有检测时间短、灵敏度高、操作简便的优点。但在实际检测过程中，极微量杂质也会

6、对SERS分析造成巨大的影响；此外，目标物质自身的荧光峰也会影响SERS对目标物质的分析。因此该方法几乎没有实际应用案例。ELISA法由于所需样品少、耗时少、检测成本低、特异性强的优点广泛应用于临床实验的初步筛选。但同时ELISA存在一些缺点如：需要提前合成分析物质的人工抗原、检测灵敏度不高、易出现假阳性结果、检测结果受抗体批次影响等，因此也限制了其适用范围。紫外光谱法是测定物质分子在紫外光区吸收光谱的分析方法，是一种最简单的检测方法。但也存在一些不足：检测灵敏度低、检测浓度范围窄、无特异性、受溶剂

7、的干扰大。电化学方法是利用电流、电阻、电压等参数与待测物含量之间的数量关系进行测定的检测方法，具有选择性好、灵敏度高的特点。但该方法对电极要求较高，且电极较脆弱、寿命短、易污染、保养复杂，因此实用性不高。上述检测方法已逐渐不能满足日益增长的实际需求，市场急需快速、简便、灵敏、准确的快检产品。因此许多生物科技公司推出了多款针对MG和LMG的快检产品，市场对这些产品也有较高的接受度，农业农村部自2011年起每年会针对孔雀石绿及其代谢物的快检产品进行现场验证，市场上快检产品的质量逐年提高，灵敏度基本能达到

8、≤2ppb，假阳性率≤10%，假阴性率≤5%。在诸多快检技术中，胶体金免疫层析法具有操作简单快速、特异性强、成本低廉、即时检测和现场大规模样品的快速筛查检测等特点，是目前最常用、最成熟的食品安全快检技术。目前基于胶体金免疫层析技术的MG快检产品在市场上呈爆发式增长，但与之相对应的是标准体系的建设严重滞后，目前仅有安徽省质量技术监督局发布的DB34/T2252-2014《水产品中孔雀石绿残留的检测胶体金免疫层析法》处于施行状态。为了规范MG的胶体金免疫层析产品，保障食品