孔雀石绿胶体金免疫层析试纸条研制+与在水产品中的应用

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1、囊萎夫学万方数据工程硕士专业学位论文孔雀石绿胶体金免疫层析试纸条研制及在水产品中的应用DevelopmentandApplicationinAquaticProductsofColloidaIGoldImmunochromatographicAssayforRapidDetectionofMalachiteGreen万方数据学术诚信声明兹呈交的学位论文，是本人在导师指导下独立进行的研究工作及取得的研究成果。除文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。本人依法享有和承担由此论文产生的权利和责任。声明人<签

2、名)：副．曾嗣时间：2u陉6．汝保护知识产权声明本人完全了解集美大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意集美大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。作者(签名)：占4．亏珥导师(蚴：荡‘时间：WB石。2年万方数据孔雀石绿胶体金免疫层析试纸条研制及在水产品中的应用摘要孔雀石绿残留在水产品中和环境中存在时间长，具有毒性高，残留高及潜在的致畸、致癌、致突变等危险性，美国、欧盟对水产品中孔雀石绿的使用都有明确的规定，

3、我国已将孔雀石绿列在禁用兽药名单中，禁止用于全部食品动物中。目前，孔雀石绿的含量一般都是使用仪器进行测定，但这些方法测定流程复杂、耗时长、成本高。试纸条测定具有易操作，费时短，成本低等优点，适于现场检测和筛查。本试验以孔雀石绿为研究对象，利用胶体金免疫层析技术，研制出用于检测孔雀石绿的免疫层析试纸条，并将其用于水产品检测。采用磁力搅拌器加热方法，用柠檬酸三钠还原氯金酸，制备出了不同粒径的胶体金溶液，粒径在26nlTl左右的胶体金标记孔雀石绿抗体的显色效果较好，最适pH为0．2mol／LK2C03添加量为4¨L／mL，抗体加入量为15gg／mL，稳

4、定剂加入量为30pL／mL的10％BSA。选用样品垫GL．b01、金标垫GL0194、吸水垫H5076和Millipore公司135硝酸纤维素膜为试纸条材料，金标抗体稀释4×包被于金标垫上，检测线和质控线上分别用2．5mg／mL的孔雀石绿．BSA结合物和0．1mg／mL的羊抗鼠IgG平行定量喷涂于硝酸纤维素膜上。试纸条对孔雀石绿标准品用目测比色法的检出限为10ng／mL。试纸条对无色孔雀石绿、氯霉素、甲基蓝、四环素等物质无交叉反应，与结晶紫交叉反应率为66．7％，特异性和稳定性较好。应用试纸条检测水产品阴性样品，假阳性率为O％；阴性样本不同加标量

5、的测定结果与液相色谱一串联质谱仪测定结果符合性较好，回收率为60％～80％，在实际样品测定时，孔雀石绿浓度大于25ng／g时，试纸条能准确测定；当阴性样本孔雀石绿添加浓度为50ng／g时，试纸条测定结果假阴性率为0％。该试纸条检测结果稳定、易于识别，可作为初步筛选孔雀石绿在水产品中残留的有效手段，也可以为其它农残兽残快速检测试纸条的研制提供参考。关键词孔雀石绿；胶体金；免疫层析法；水产品；快速检测万方数据DevelopmentandApplicationinAquaticProtuctsofColloidalGoldImmunochromatog

6、raphicAssayforRapidDetectionofMalachiteGreenAbstractMalachitegreenwithhightoxicityandhighpersistentcarlresiduesinaquaticproductsandenvironmentforalongtimeandhasteratogenicity,carcinogenicityandmutagenicity．TheMGresiduesinaquaticproductsareclearlylimitedintheUSAandtheEU．Malach

7、itegreenwasbannedintheveterinarydruglistandprohibitedtouseinfoodproducinganimals．Atpresent，thecontentofMGareusuallydetectedbyinstrument，butthesemethodsneedcomplexpre—treatment，longanalysistime，highcost．However,goldimmunochromatographicassayhasadvantagesofeasyandsimpletohandle

8、，takingashorttime，lowcost．Itissuitableforon—sitetestingandmassscreen