fb_1胶体金免疫层析试纸条的研制及应用

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1、４分类号：Ｓ８５６．９单位代码：１０３６密级：学号：１打２０％］会歡怎必少、考硕±学位论文ＦＢＪ交体金免疫层析试纸条的研制及应用ＤｅｖｅｌｏｍｅｎｔｏｆＣｏｌｌｏｉｄａｌＧｏｌｄＩｍｍｕｎｏｃｈｒｏｍａｔｏｒａｈｔｅｓｔｐｇｐｙＳｔｒｉｉＦｏｒＦＢａｎｄｉｔｓＡｌｉｃａｔｉｏｎｐｉｐｐ研究生：獎海亲片指导教师；吴金节教授合作指导教］１私王希春副教授申请学位口类级别：农学硕ｄｒ专业名称：临床兽医学研究方

2、向：畜禽中毒病与食品安全所在学院：动物科巧学院答辩委员会主席：二〇￣五年六月AnhuiAgriculturalUniversityMasterThesisDevelopmentofColloidalGoldImmunochromatographytestStripforFB1anditsApplicationPostgraduate：FANHai-XinAdvisor：Prof.WUJin-JieCooperativeAdvisor:AssociateProf.WANGXi-ChunAc

3、ademicDegreeAppliedfor：MasterofAgricultureMajor：ClinicalVeterinaryScienceResearchField：LivestockandpoultrypoisoningdiseaseandfoodsafetyInstitute：CollegeofAnimalScienceandTechnologyAnswerCommitteeChairman:June2015独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进斤的研究工作及取得的研究成，

4、果，论。尽我所知除了文中特别加标注和致谢的地方外文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明。与我确的说明并表示了谢意。０／口研巧生签名；时间：之尽年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文的规定，目Ｐ：学校有权保留，Ｌ送交论文的复印件和磁盘，ＪＸ采用影巧允许论文被查阅和借阅可、缩印或扫描等复Ｌ制手段保存、汇编学位论文。同

5、意安徽农业大学可Ｕ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。做密的学位论文在解密后应遵守此协议）＇〇研巧生签名：續爲时间：如少年養月曰新／Ｉ＼？ｆ乂—一口（第导师签名：＾Ｖ时间：又＾〇年占月｜中文摘要伏马菌素是由串珠镰刀菌（Fusariummoniliforme）所产生的一类水溶性代谢产物，能污染玉米、小麦、水稻等谷类及其制品。伏马菌素B1（FumonisinB1，FB1）是串珠镰刀菌培养物的主要成分，也是导致伏马菌素毒性作用的主要因素。胶体金免疫层析法

6、是基于单克隆抗体和胶体金材料的基础上发展起来的一种侧向层析技术，已成为目前真菌毒素检测的新的研究方向。该检测方法操作简便，适应于大量样本的快速检测。本试验采用免疫层析法，研制出FB1检测用胶体金试纸条，并用于玉米中FB1的快速检测。将杂交瘤细胞进行扩大培养，注射入小鼠腹腔，收集腹水并进行纯化，制备出FB1单克隆抗体，分别通过聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE）和间接酶联免疫法（Ci-ELISA）对抗体的纯度及效价进行检测；采用戊二醛一步法对半抗原FB1与卵清蛋白（OVA）偶联，制备完全抗原，通过SDS-

7、PAGE和质谱法（MS）对FB1与OVA鉴定偶联效果。胶体金溶液的制备采用柠檬酸钠还原法。试验对金标抗体、FB1-OVA包被量及羊抗鼠IgG包被浓度进行选择，并对试纸条的应用性能进行评价。试验结果如下：1．单克隆抗体浓度为1.3mg-1·mL，经过间接ELISA方法的检测，可得单抗的效价为1:1024。人工抗原FB1-OVA偶联成功，FB1与OVA的偶联比为6.2:1，浓度为0.8mg-1·mL。2．本试验制备的胶体金溶液粒径为25nm、20nm、15nm。制备金标抗体最适pH值为7.0，即1mL胶体金溶液

8、加入15μL0.2mol-1·LK2CO3。胶体金与单克隆抗体的最佳结合量为1mL胶体金溶液加入7μL抗体。胶体金免疫层析试纸条的金标抗体最佳包被量为0.4μg-1-1·cm，检测抗原最佳包被量为0.3μg·cm，质控线最佳包被浓度为0.10mg·mL-1。试纸条的灵敏度为2ng-1·mL，最佳判定浓度为40ng-1·mL。3.本试验研制的胶体金免疫层析试纸条与AFB1、DON、ZEN和OTA等几种常见真菌毒素无