CJT 150-2001 城市供水 致突变物的测定 鼠伤寒沙门氏菌哺乳动物微粒体酶试验

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1、CJ中华人民共和国城镇建设行业标准CJ/'r141-150-2001城市供水水质检验方法标准及编制说明和研究报告2001一07门7发布2001门2一01实施中华人民共和国建设部发布一、城市供水水质检验方法标准StandardmethodsfortheexaminationofwaterofurbanwatersupplyCJ/T150-2001前言本标准由建设部标准定额研究所提出。本标准由建设部给水排水产品标准化技术委员会归口。本标准由国家城市供水水质监测网天津监测站负责起草。本标准起草人:张旭东、李墙。本标准参

2、加验证单位:北京监测站、上海监测站、深圳监测站、武汉监测站、昆明监测站中华人民共和国城镇建设行业标准城市供水致突变物的测定鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验CJ/T150一2001Urbanwatersupply-Determinationofmutagenesis-Salmonellatyphimurium/Mammalsmicrosomalenzymetest范围本标准规定了用鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验测定城市供水的致突变性本标准适用于城市供水及其源水水质致突变性的测定。本标准规定以2L为接种的最

3、高检测水样体积。2方法人工诱变鼠伤寒沙门氏菌突变株(即组氨酸营养缺陷型)，在无组氨酸的培养基上不能生长，如受到致突变物的作用，使其基因发生变化而回复突变为原来的野生型，即使在缺乏组氨酸的条件下也能生长(如下图所示)。其中一些致突变物为直接致突变物。另外一些为间接致突变物.即需代谢活化后具有致突变性野生型到噢ff组氨酸营养缺陷型C7竺}k$野生型试剂和材料3.1营养肉汤牛肉浸膏59蛋白陈10g氯化钠59蒸馏水1000niL将上述成分混合后，加热溶解，用饱和NaOH溶液调节pH值至7.2，分装于试管中，每管10mL,

4、经121C高压湿热灭菌20min,4'C冰箱保存，供增菌使用。(保存期7天)3.2v-B液柠檬酸(C,H,O·H20)10g磷酸氢二钾(K2HP04·31-120)65.5g磷酸氢钱钠(NaNH,HP04·4H20)17.5g硫酸镁(MgSO·7H,O)1.0g蒸馏水500mL将上述试剂在少量蒸馏水中溶解后.稀释至500mL。硫酸镁水溶液在最后缓慢加人以防止产生沉淀.经滤纸过滤后，于4C冰箱保存。3.3底层培养基中华人民共和国建设部2001一07-17批准2001一12-01实施5sCJ/T150一2001葡萄糖

5、209V-B液100mL琼脂17g蒸馏水900mL将V-B液用饱和NaOH溶液调节pH值至7.0。另将葡萄糖溶于100mL蒸馏水中(溶液变黄者弃去重配)，两者于115℃灭菌10mine琼脂于800mL蒸馏水中煮沸溶化，121℃灭菌20min，待其凉至80C左右，将前两者倒人混匀。浇制平板，每皿25mL。于4'C冰箱中可保存14天。3.40.5mmol/L一组氨酸一0.5mmol/L一生物素溶液成分L一组氨酸(FW155.7)7.8mg「或L一组氨酸盐酸盐(FW209.63)10.5mg]D一生物素12.4mg蒸馏

6、水100mL混匀溶解，于4C冰箱中保存。3.50.1mol/L一组氨酸溶液L一组氨酸(FW155.7)1.56g[或L一组氨酸盐(FW209.63)2.10g]蒸馏水100mL混匀溶解，于4'C冰箱中保存。3.6营养琼脂琼脂16g营养肉汤1000mL将琼脂倒人营养肉汤内加热煮沸，用饱和NaOH溶液调节pH值至7.2^7.4,121C高压灭菌20min。于4'C冰箱中可保存14天。3.7H一顶层培养基琼脂0.6g抓化钠0.5g蒸馏水100mL将琼脂和抓化钠溶于蒸馏水中加热煮沸，以每支试管2.5mL分装，加塞,121

7、C高压灭菌20min。于4℃冰箱中可保存14天。3.8H一顶层培养基H一顶层培养基100mL。.1mol/LL一组氨酸溶液10mL将加热溶化了的H一顶层培养基加人0.1mol/LL一组氨酸溶液10mL混匀，趁热以每支试管2.5mL分装，加塞，121C高压灭菌20min。于4'C冰箱中可保存14天。3.9顶层培养基H一顶层培养基100mL0.5mmol/LL一组氨酸一。.5mmol/LD一生物素溶液10mL将加热溶化了的H一顶层培养基加人0.5mol/LL一组氨酸-0.5mmol/LD一生物素溶液后混匀，趁热以每支

8、试管2.5mL分装，加塞,121C高压灭菌20min。于4'C冰箱中可保存14天。3.100.2mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.4)每100mL含0.2mol/L磷酸氢二钠(Na}HP04·12H,O)81ml60CJ/T150一20010.2mol/L磷酸二氢钠(NaH2P0,·2H20)19mL若pH值小于7.4，用0.2mol/L磷酸氢二钠调节至7.4,115'C高