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1、2021/9/91第三章培养基及一般操作技术2021/9/92第一节培养基的概念、种类和成分第二节培养基制备第三节一般操作技术在离体培养条件下,不同种植物的组织对营养有不同的要求,甚至同一种植物不同部位的组织对营养的要求也不相同,只有满足了它们各自的特殊要求,它们才能很好地生长。因此,没有一种培养基能够适合一切类型的植物组织或器官。2021/9/93第一节培养基的概念、种类和成分一、概念:培养基(culturemedium)是人工配制的含有各种营养成分,经过严格灭菌的适于植物生长重要基质。在建立一项新的培养系统时,首先必须找到一合
2、适的培养基,培养才有可能成功。在植物组织培养历史进程中,事实上也紧密地伴随着培养基的研制史。2021/9/942021/9/95不同的植物不同培养部位不同的培养目的需选用不同的培养基二、培养基的种类培养基多数以发明人的名字来命名,如White培养基,Murashige和Skoog培养基(简称MS培养基),也有对某些成分进行改良称作改良培养基。2021/9/96培养基种类MS培养基1962B5培养基1968White培养基1937N6培养基1975KM-8P培养基1974Miller培养基1965Nitsch培养基1963WPM培养
3、基19331962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。特点:无机盐离子浓度高,硝酸盐含量较高广泛用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培养2021/9/97MS培养基及特点:1968年由Gamborg等为培养大豆根细胞而设计的。特点:含有较低的铵,这可能对不少培养物的生长有抑制作用。双子叶植物尤其木本植物组培可选择2021/9/98B5培养基及特点:1937年由White为培养番茄根尖而设计的,1943年随其专著的出版而问世。1963年又作了改良,称作White改良培养基,提高了MgSO4的浓度和增加了硼素。2
4、021/9/99White培养基特点:特点:无机盐数量较低适于生根培养1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计的2021/9/910N6培养基特点:特点;成分较简单,KNO3和(NH4)2SO4含量高适合花药培养特点:有机成分较复杂,它包括了所有的单糖和维生素广泛用于原生质体培养,包括融合的培养2021/9/911KM-8P培养基特点:1974年为原生质体培养而设计的。2021/9/912培养基种类固体培养基液体培养基通气性较好,便于操作,但营养分布不均,生长发育不整齐。营养分布均匀,生长整齐一致,但通气性差。培养基按是
5、否加入凝固剂分为2021/9/913培养基成分三、培养基的成分水无机盐有机物植物激素培养体的支持材料其它辅助性物质水是植物原生质体的组成成分,也是一切代谢过程的介质和溶媒。它是生命活动过程中不可缺少的物质。配制培养基母液时要用蒸馏水,以保持母液及培养基成分的精确性,防止储藏过程发霉变质。大规模生产时可用自来水。但在少量研究上尽量用蒸馏水,以防成分的变化引起不良效果。2021/9/914(一)水无机营养成分就是人们平常所说的矿物质、无机盐或无机元素。它们在植物生活中具有非常重要的作用。如氮(N)、硫(S)、磷(P)是蛋白质、氨基酸、
6、核酸和许多生物催化剂即酶的主要或重要组分。它们与蛋白质、氨基酸、核酸和酶的结构、功能、活性等有直接的不可缺少的关系。2021/9/915(二)无机元素根据植物对这些元素需要量的不同或者根据目前植物培养基中添加的这些元素量的大小,可将它们分成大量元素和微量元素。大量元素:一般指在培养基中的浓度大于0.5mmol/L的元素(或﹥100mg/L)。主要包括氮、磷、钾、钙、镁和硫六种。微量元素:指小于0.5mmol/L的元素或﹤100mg/L)。2021/9/916大量元素(以Ms培养基为例)序号化学式化学名称用量mg/L1KNO3硝酸钾
7、19002NH4NO3硝酸铵16503KH2PO4磷酸二氢钾1704MgSO4.7H2O硫酸镁3705CaCL2.4H2O二氯化钙440微量元素(以MS培养基为例)序号化学名称化学式用量(mg/L)1碘化钾KI0.832硼酸H3BO36.23硫酸锰MnSO4.4H2O22.34硫酸锌ZnSO4.7H2O8.65钼酸钠Na2MoO4.2H2O0.256硫酸铜CuSO4.5H2O0.0257氯化钾CoCL2.6H2O0.0251.大量元素(1)N:是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分,是生命不可缺少的物质。在制
8、备培养基时以硝态氮(NO3-N)或氨态氮(NH4-N)两种形式供应。大多数培养基既含有硝态氮(NO3-)又含有氨态氮(NH4+)。氨态氮(NH4-N)对植物生长较为有利。供应的物质有KNO3、NH4NO3等。有时,也添加氨基酸来补充氮素。缺氮时某些
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