小鼠染色体标本制作、染色及观察

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1、山东大学实验报告科目细胞生物学实验题目小鼠染色体标本的制作、染色与观察姓名***系年级2011级生物基地学号***同组者***日期2013/05/23、302013/05/30小鼠染色体标本的制作、染色与观察【实验目的】1.初步掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，了解各操作步骤的原理。2.了解常用实验动物染色体的数目及特点。3.认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组形图。【实验原理】凡处于活跃增殖状态的细胞，或者经过各种处理后，任何动物组织的细胞就可进入分裂，均可用于染色体分析。在正常动物体内，精巢

2、和骨髓均为是活跃分裂的组织。给动物注射一定剂量的秋水仙素，即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规空气干燥法制备染色体，即可得到大量可分析的染色体标本。本方法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌操作，易于推广。骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。但在取材方面，精巢又比骨髓要简易一些，故本实验选用小鼠的精巢为实验材料。对于小鼠精巢染色体标本的制作，一般包括以下几个要点:1.用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期,使中期染色体停留在赤道面处;2.用低渗法使细胞膨胀,以至于在滴片时细胞被胀破,使细胞

3、的染色体铺展到载玻片上;3.空气干燥法可使细胞的染色体在载片上展平,经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象。Giemsa染色是最常用的染色方法之一，适用于多种细胞和染色体染色。主要用Giemsa染液可以将细胞核染成紫红色或蓝紫色，胞浆染成粉红色，在光镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像。【实验材料】1.试剂：秋水仙素、生理盐水（0.9%的NaCl溶液）、0.3%KCl低渗溶液、固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）、Giemsa染液。2.器具：解剖盘、镊子、眼科剪、小烧杯（×2）、吸管、玻璃刻度离心管、恒温水浴锅、离心机、铜网、预

4、冷载玻片、记号笔、普通光学显微镜、玻璃等。3.材料：小白鼠。【实验步骤】1.取雄性小鼠以每克体重4μg注射秋水仙素，经14～16小时后，断头法杀死小鼠，4山东大学实验报告取出睾丸用生理盐水（0.9%的NaCl溶液）洗去血污。2.将睾丸放入装有1ml0.3%KCl低渗溶液的小烧杯中剪碎至呈乳白色。3.用铜网过滤到玻璃刻度离心管中，再加0.3%KCl缓冲溶液至4ml。4.将离心管放入37℃恒温水浴中静置30分钟，进行低渗处理。5.以800～1000转/分的转速离心8分钟。6.取出离心管，弃去上清液，加入2ml固定液（甲醇：冰醋酸=

5、3：1），并用吸管至管底吹气，轻轻打散细胞，固定8分钟。7.再以800～1000转/分的转速离心8分钟。8.取出离心管，弃去上清液，加入1ml固定液，再制成细胞悬液，固定5分钟。9.取洁净的低温预冷载片，距载片10～15cm高度滴下2～3滴细胞悬液，从载片一边向另一边轻轻吹气，并同时轻轻敲打载片，以使细胞均匀分布和促使染色体展开。10.用滤纸擦去载片上多余液体，空气干燥或成文火干燥。11.用Giemsa染色20～30分钟，细水冲洗玻片背面，去多余染液，气干。12.镜检：低倍镜下寻找分散良好、染色适中的分裂相，高倍镜或油镜下观察

6、染色体形态并计数。【实验结果】本实验采用的是小鼠的精巢，视野中可见大量的精子（图中未给出），它们有一个比较圆的头部和鞭毛，还有一些细胞有一个尖，老师说，那是未变形的精子。部分细胞处于减数第一次分裂中期，这样的细胞是二倍体，应有40条染色体；有些处于减数第二次分裂中期，这样的细胞是单倍体，应有20条染色体。还有一些细胞处于分裂期，但不是中期，这类细胞染色体的凝集程度不是很高。经过仔细查找，最终找到处于减数分裂中期的染色体。如图，处于减数分裂中期的染色体染色质凝缩程度达到最大。小鼠的染色体多为端着丝粒染色体（17、18对染色体为亚

7、端部），呈“V”字形或“U”字形，由于显微镜放大倍数比较小且手机像素不是很高，导致无法看清中期染色体的形状，只能看到染色体呈短棒状。由图可数出，可分辨的染色体数目为13条，还有一部分染色体堆叠在一起。4山东大学实验报告图：经秋水仙素处理的小鼠精细胞染色体标本照片（10×40）【实验结果分析】实验结果中，可分辨的染色体数目为13条，还有一部分染色体堆叠在一起，没有完全展开，这说明在对染色体展平的步骤没有做好，以后应改进。已知小鼠染色体的数目为40条，而本次实验所得结果远小于这个数值，分析原因可能有二：1.在滴片、染色、冲洗等步骤

8、中操作不当，造成染色体丢失；2.该细胞处于第二次减数分裂中期，染色体总数为20。也可能是两种原因的共同结果。【注意事项】1.向小鼠腹腔注射秋水仙素时，用左手抓住小鼠背部的皮，右手持注射器，进针时倾斜45°，在开始注射前，将针头略向上挑，以免将秋水仙素注入小鼠的肠道内。注射过程