实验一染色体玻片标本地制作与染色体观察.ppt

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时间:2020-04-08

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1、实验一染色体玻片标本 的制作与染色体观察辽宁师范大学生命科学学院张剑锋一、实验原理植物根尖的分生细胞的有丝分裂,每天都有分裂高峰时间(am9,pm3),此时把根尖固定,经过染色和压片,再置放在显微镜下观察,可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。二、实验目的根尖染色体压片法是观察植物染色体最常用的方法,也是研究染色体组型、染色体分带、染色体畸变和姊妹染色单体交换的基础。三、实验材料大蒜(Aillumsativum)(2n=16)的鳞基。四、实验器具和药品1.用具:染色板、载玻片、盖玻片、指管、温度计、试剂瓶、滴瓶、镊子、解剖针和毛

2、边纸等。2.药品:无水酒精、70%酒精、冰醋酸、对二氯苯或秋水仙素、醋酸钠、碱性品红、石碳酸、甲醛、山梨醇、纤维素酶、果胶酶、中性树胶或油派胶(Euparal)和二甲苯。卡诺固定液的配制:3份无水酒精,加1份冰醋酸(现配现用)。酶液的配制:以0.1mol/L醋酸钠为溶剂,配成纤维素酶(2%)和果胶酶(0.5%)的混和液。染色液的配制:配方Ⅰ:石碳酸品红(Carbol.fuchsin)染色液,先配母液A和B。母液A:称取3克碱性品红,溶解于100毫升的70%酒精中(此液可长期保存)。母液B:取母液A10毫升,加入90毫升的5%石碳酸水溶液

3、(2周内使用)。石碳酸品红染色液:取母液B45毫升,加入6毫升冰醋酸和6毫升37%的甲醛。此染色液含有较多的甲醛,在植物原生质体培养过程中,观察核分裂比较适宜,后来在此基础上,加以改良的配方Ⅱ,称改良石碳酸品红,可以普遍应用于植物染色体的压片技术。配方Ⅱ:改良石碳酸品红 取配方Ⅰ石碳酸品红染色液2-10毫升,加入90-98毫升45%的醋酸和1.8克山梨醇(sorbitol)。此染色液初配好时颜色较浅,放置二周后,染色能力显著增强,在室温下不产生沉淀而较稳定。五、实验说明1.根尖取材方便,是观察植物染色体最常用的材料,也可以用茎尖作为材料

4、。2.植物细胞分裂周期的长短不同,在十到几十小时之间,温度影响分裂周期,对于一个不太熟悉的实验材料,最好在特定温度下长根,掌握有丝分裂高峰期,以便得到更多的有丝分裂的细胞。3.前处理的目的是降低细胞质的粘度,使染色体缩短分散,防止纺锤体形成,让更多的细胞处于分裂中期,一般在分裂高峰前,把根尖放到药剂中处理3-4小时。可处理的药剂很多,如秋水仙素、对二氯苯、8-羟基喹啉等。4.解离的目的是使分生组织细胞间的果胶质分解,细胞壁软化或部分分解,使细胞和染色体容易分散压平,解离方法有酸解法和酶解法。六、实验步骤(一)培养及前处理:将大蒜鳞基置于

5、盛水的小烧杯上,放在25℃温箱中,待根长到2cm左右时(见图1-1),在上午九时摘下根尖,放到对二氯苯饱或0.02%秋水仙素溶液中,浸泡处理3-4小时。图1-1大蒜的培养(二)固定及保存:经过前处理的根尖,再放到卡诺固定液中固定24小时。固定材料可以转入70%酒精中,在4℃冰箱中保存,保存时间最好不超过二个月。(三)解离(酸解):从固定液中取出大蒜根尖,用蒸馏水漂洗,再放到0.1mol/LHCl中,在60℃水浴中解离8-10分钟,用蒸馏水漂洗后,放在染色板上,加上几滴改良石碳酸品红染色液,根尖着色后即可压片观察。(四)压片:把染色后的根

6、尖放在清洁的载玻片上,用解剖针把根冠及延长区部分截去,加上少量染色液,并盖上盖玻片。一个解离良好的材料,只要用镊子尖轻轻的敲打盖玻片,分生组织细胞就可铺展成薄薄的一层,再用毛边纸把多余的染色液吸干,经显微镜检查后,选择理想的分裂细胞,再在这个细胞附近轻轻敲打,使重叠的染色体渐渐分散,就能得到理想的分裂相,要达到这个目的,必需掌握以下几点:1.压片材料要少,避免细胞紧贴在一起,细胞和染色体没有伸展的余地。2.用镊子敲打盖玻片时,用力要均匀,若在压片时稍不留意,使个别染色体丢失,而被迫放弃一个良好的分裂相的细胞。(五)封片:把压好的玻片标本

7、,放在干冰或冰箱结冰器里冻结。然后用刀片迅速把盖玻片和载玻片分开,用电吹风把玻片吹干后,滴上油派胶加上盖玻片封片,或经二甲苯透明后,滴中性树胶,加盖玻片封片,做成永久封片。七、结果拍摄并绘制根尖染色体的各分裂相。图1-2有丝分裂模式图图1-3低倍镜下大蒜根尖细胞有丝分裂各期图1-4大蒜根尖细胞有丝分裂后、末期八、作业1.绘制大蒜根尖细胞有丝分裂各时期图象。2.说明某一影响制片效果因素的方法、目的和原理。

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