果蝇唾腺染色体标本的制作及观察

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1、姓名系年级学号日期科目遗传学实验题目果蝇唾腺染色体的标本制作及观察果蝇唾腺染色体的标本制作及观察摘要：多线染色体，又称作唾腺染色体，是果蝇三龄幼虫的唾腺发育到一定阶段后，细胞的有丝分裂停留在间期，唾腺细胞数目不增加，但体枳增大，每条染色体的常染色质区的核蛋白纤维（染色质纤维）不断复制，其复制产物不分开，成千上万条染色质纤维平行而精巧地排列形成一大束宽而长的带状物。本次实验意在了解并掌握果蝇三龄幼虫唾腺的剥离技术，掌握唾腺染色体标本的制备方法，以及了解唾腺染色体的形态结构特点。本次实验以果蝇三龄幼虫为实验材料，经过剥离唾腺、

2、解离、水洗、染色、压片和镜检六个步骤，在显微镜下找了果蝇唾腺染色体，使我们对果蝇唾腺染色体的大小和形态特征有了更加直观的了解。引言1881年，意大利的细胞学家巴尔比尼（Balbiani）在双翅目昆虫摇蚊幼虫的唾腺细胞间期核中发现了一种巨大的染色体，由于存在于唾腺细胞中，所以又称为唾腺染色体。通过切出的片子很难推测整体结构，人们误认为这种结构是一条具有很多横纹特征的线状结构缠绕而成，故命名为“spireme”。1930年，Kostoff提出遗传物质可能位于spireme横纹上的假设。1932年，EmilHeitz与HansB

3、auer通过压片法，发现“spireme”是由多个独立的小体连结在一个中心形成的，并证明它的本质上是染色体。1933年，美国学者贝恩特（Painter）等在果蝇和其它双翅目昆虫的幼虫唾脱细胞间期核中发现了巨大染色体（giantchromosome）。目前，对于唾腺染色体的研宄还在进行中，并且有了越来越多的发现：己经有人对唾腺染色体进行了详细的分区研允，将整个唾腺染色体分为102个区，每个区分为6个段，每个段又分为若干条横纹。横纹可以作为基因定位的依据，横纹数目和排列的变化可以作为染色体结构改变的依据。1935年遗传学家Br

4、idges就是用基因定位的方法绘制了第一张唾腺染色体细胞学图。各国的研宂考还在不断地补充、完善这张细胞学图。唾腺染色广泛应用于细胞遗传学、发生遗传学、进化遗传学及分子遗传学的研宂中。【实验材料】1.试剂：0.7%生理盐水，lmol/LHCI，蒸馏水，改良苯酚品红染液；2.器具：解剖镜，显微镜，解剖针两根，镊子，载玻片，盖玻片，吸水纸；3.材料：果蝇的三龄幼虫。1.剥离唾腺在一干净的载玻片上滴一滴生理盐水，选择行动迟缓、肥大、爬在瓶壁上即将化蛹的三龄幼虫置于载玻片上，每只手各持一个解剖针，在解剖镜下进行操作。由于果蝇的唾腺位

5、于幼虫体前於一1/4处，所以左手持解剖针按压住虫体前端三分之一的部位，固定幼虫，右手持解剖针扎住幼虫头部口器部位，适当用力向右拉唾液腺体随之而出。唾腺是上小下人的囊状结构，唾腺旁附着带状的脂肪。在解剖镜下，（用侧或顶光源照射）可见唾腺是接近透明的结构，而脂肪通常呈黑色。唾腺的细胞较人，在解剖镜T依稀可见其轮廓，放在显微镜低倍镜上下调焦可清楚地看到。用解剖针去除唾腺以外的组织，再小心地剔除唾腺上的脂肪。2.解离在唾腺组织上滴一滴lmol/LHCI,解离2-3min,使组织松软，利于染色体的分散，吸去HCI。3.水洗用水冲洗2

6、-3次，前两次每次l-2min,最后一次停留20分钟。用滤纸小心吸去多余的蒸馏水。4.染色滴加改良苯酚品红溶液，染色10分钟。染色时间不可过长，否则背景也无色。1.压片染色完成后，盖上干浄的盖子，并覆一层滤纸，将片子放在实验台上，用大拇指用力压住，并横向揉几次。（注意不要使盖玻片移动，用力和揉动是一个方向，不能来回揉。）2.镜检先用低倍镜进行观察，找到分散好的染色体再转用高倍镜进行观察。【实验结果】我的实验结果：参考同学实验结果：（图片来源：李苗）3L染色体X染色体：末端有明显蓬突。染色中心花了很长时间，费了很大力气，终于

7、做出一张装片，结果染色体没有展开，且横纹不明显。分析原因为.•所选果蝇幼虫还没达到三龄幼虫期。【实验结果分析】自己做出的装片结果不理想，原因己经分析过，下面对所参考的同学的实验结果进行分析。理想的照片应该可以清晰地辨认出X、2L、2R、3L、3R、4六条染色体臂。参考图中，只能较清楚地数出有5条染色体臂。原因：染色体没有完全伸展开，这是压片时不够充分所致，压片技巧还需要提高摸索。由于横纹不够清楚，只能明确辨认出染色中心以及特征较明显的X染色体、2L染色体、31_染&体。对其余2条染色体臂的判断不一定正确。【注意事项】1.要

8、选择行动迟缓、肥大、爬在瓶壁上即将化蛹的三龄幼虫作为实验材料。我做的第一张装片由于选的果蝇幼虫时期不对，导致实验结果中，细胞内的唾腺染色体没有展开，且横纹不明显。2.生理盐水不可太多，否则幼虫会漂浮而且活跃，如水多了，应在剥离唾腺前吸走些，唾腺剥离后不要吸水，以防将唾腺一起吸走。3.在剥离唾腺的过程中，