果蝇唾腺染色体的标本制备和观察

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1、果蝇唾腺染色体的标本制备和观察摘要多线染色体存在于某些生物特定生命周期的某些细胞中。本实验观察的多线染色体是果蝇唾腺染色体，在其染色体标本中可以观察到果蝇唾腺染色体形态巨大，由5条长染色体和1条短小的染色体组成，他们聚集在染色中心，横纹条带深浅不一，疏密各异，遍布每条多线染色体臂，有些地方有还胀泡出现。由于多线染色体因其形态巨大，横纹明显，它常被作为基因定位的良好材料，并且广泛应用于细胞遗传学、发生遗传学、进化遗传学及分子遗传学的研究中。关键词多线染色体果蝇唾腺染色体横纹胀泡1.引言染色体由DNA和

2、蛋A质构成，作为DNA的载体，有着不可或缺的的作用，因此是科学家广泛研究的材料。然而染色体的研究通常面临两个W难:一足染色体很小:二足除极少数动植物，如玉米飢线期的染色体上其有染色粒这样的结构可以作为识別或定位的标忐外，大多数生物的染色体都没冇标志。而多线染色体的染色体足够大，染色体h的识别标记足够多，这将对遗传学研究将提供不少的便利。本次实验观察的多线染色体有如下特征：①果蝇唾腺染色体是一种缆状的巨大染色体。曲于果蝇幼虫的唾腺细胞发育至一•定阶段就停止冇丝分裂，终止在间期，但吨•液腺细胞核的染色体

3、仍不断地进行自我S制，但并未发生细胞核分裂，复制后的子染色体彼此不分开，形成了多线染色体，对于黑腹果蝇嗬腺染色质的复制可达9次之多，单条染色体忾可达275Pm,约为普通中期染色体的150倍。②果蝇唾腺染色体巾5条长染色体和1条短小的染色体纟II成，他们聚集在染色屮心。唾腺染色体由于体联会的原因只柯二倍体的单元数，第I染色体(X染色体)为端着丝粒，所以染色体的一端在染色中心上，W—端游离，第II、111染色体均为中着丝粒，它们从染色体中心呈V字形向外伸展,所以分别能看到2L(leftarm)、2R(r

4、ightarm)、3L和3R4条长臂；点状的第IV染色体很短小，为端卷丝粒。因此，可以见到5条很长的和一条紧靡染色体中心的短小的染色体。A雄性幼虫中，唾腺染色体上不见Y染色体，它不与X染色体联会，而且其着丝粒及附近的异染色质参与染色屮心的形成。这可能是雄性幼虫唾腺染色体屮的X染色体比其他儿对常染色体相对狭窄一些的缘故。染色屮心足唾腺染色体形成吋，各条染色体的着丝粒和近着丝粒的奍染色质区聚积在一起形成一种结构，此处的染色质连接不紧密，横纹结构也不明显。①果蝇唾腺染色体横纹条带深浅不一，疏密各异，遍布每

5、条多线染色体臂。染色质丝的不同部位螺旋化程度不M。其中螺旋化程度较高的形成染色较深的暗纹，螺旋化程度较低的部位形成了染色较浅的明纹。横纹数S巨大，在黑腹果蝇中对达5000多条。果蝇唾腺染色体每一臂上所奋的横纹的数目、人小和位S是恒定的，即具旮种的特征，横纹乂与某些特定的基因相联系，因此其可以作为基因定位的依裾，横纹数目和排列的变化可以作为染色体结构改变（缺失、倒位、易位等）的依据。②果蝇唾腺染色体臂上可观察到胀泡。当基W活跃转录的时候，多线染色体上的DNA会解开螺旋，染色体某些带纹变得疏松膨大而形成

6、胀泡。不论是在经典的细胞遗传学时代还是在当今的基W组学时代，多线染色体都为遗传学.尤其是果蝇的遗传学研究提供了不少便利，这种便利是其他一些物种通常所不具备的。双翅目昆虫多线染色体的原位杂交方法可以确定一条RNA或DNA序列在染色体上位置，将许许多多的DNA序列与果蝇的多线染色体进行原位杂交，就可以了解这些序列在果蝇染色体上的顺序，进而拼接出一长段甚至一条染色体的DNA顺序。果蝇的基因组测序就利用了这种方法。而在不具备多线染色体的物种中耍拼接DNA序列就困难多了。这就是制备多线染色体至今仍是果蝇遗传学

7、研究的基木技术的原因。唾腺染色体广泛应用于细胞遗传宁、发生遗传学、进化遗传学及分子遗传乎的研究屮。唾腺染色体的制片足研究唾腺染色体的关键步骤，本实验用压片法进行制片观察果蝇的唾腺染色体。1.材料和方法2.1材料、试剂和器材实验材料：果蝇的三龄幼虫。实验试剂:生理盐水（0.9%NaCI溶液）、蒸馏水、lmol/LHCI、45%乙酸、改良苯酚品红染液实验器材：显微镜、解剖镜、两根解剖针（针尖要尖细些好）、载玻片、盖玻片（20mmX20mm）、滤纸条（约0.5mmX3mm）、小毛笔。2.2方法2.2.1三

8、龄幼虫的饲养饲养方法一般遵循以卜规则：①培养基富含营养。按果蝇培养基配方配制培养基。在一龄幼虫出现后,每天在培养葙表而薄薄地滴上一层用新鲜的酵母或干酵母配成的2%〜4%的水溶液，作为幼虫的补充食物，二、三龄幼虫期则滴加10%左右的酵母液；②虫口密度要小。在-•新的培养瓶中接种10对左右亲蝇，24小时后即把它们清除，这样就不会因瓶中虫口密度太人而影响幼虫发育；③低温培养。在18〜20°C的低温下培养最好，25°C培养也行。2.2.2剥离唾腺要获得好的实验结果，选材是关键