《受体研究技术》PPT课件

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1、受体研究技术Techniquesinreceptorresearch本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!相关帮助需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎fantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库，其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成，以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台需要相关

2、的实验室仪器设备、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外诊断试剂及耗材与技术服务信息的，可以访问探生网biomean进行咨询，期待您的加入本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!第八章组织化学技术在受体定位中的应用第一节在受体定位中免疫组化的原理和方法免疫组化的原理免疫组织化学(Immunohistochemistry)又称免疫细胞化学(Immunocytochemistry)﹐其主要原理是用标记的抗体对细胞或组织内的相应抗原(受体)进行免疫化学反应,

3、经过组织化学呈色后用显微镜观察受体在组织细胞中的分布和定位。膜受体或核受体Ag制备相应的特异性抗体标记抗体免疫组织化学测定本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!免疫组织化学优缺点高特异性:抗原抗体反应是特异性强,识别能力可达到单个氨基酸水平.高度敏感性:使用高敏感的和高亲和力的抗体﹐可检出细胞和组织内超微量的抗原成份。高分辨能力:经呈色反应,在受体原位形成有色沉淀或荧光,其分辨能力远大于放射自显影技术。免疫组织化学方法唯一的缺点是无法测定受体-配基反应的亲

4、和性(Kd值)本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!包括﹕1.抗原(受体)提取和纯化抗原可为完整蛋白或一段特异性片段。2.免疫动物或细胞融合(单克隆抗体)。3.抗体效价检测和提取。4.抗体标记。5.细胞和组织标本的制备。6.免疫组织化学反应和显色。7.观察和记录结果。免疫组织化学的全部过程本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!免疫组织化学标本的制备抗原(受体)的准确显示和定位与制备的组织和细胞标本质量密切相关细胞

5、和组织标本的取材细胞和组织的固定组织切片*细胞和组织标本的取材细胞标本:细胞涂片组织标本:取新鲜组织,速冻或立即用固定剂固定.本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!保持细胞和组织的原有结构,防止组织自溶.不仅使细胞和组织内蛋白质凝固，终止和抑制外源性和内源性酶活性，更重要的是最大限度地保存细胞和组织的抗原性及防止抗原的扩散。*细胞和组织的固定1固定剂一般为醛类固定剂和醇类固定剂醛类固定剂醛类为交联剂，其作用是交联组织中的氨基，保存抗原于原位。其特点是组织穿

6、透力强，收缩小。常见有:福尔马林,多聚甲醛等丙酮及醇类固定剂该类固定剂为沉淀剂,其作用是沉淀蛋白质和糖,组织穿透性很强,保存抗原的免疫活性较好.如乙醇,氯仿,冰醋酸等本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!固定组织时应注意:*力求保持组织新鲜,勿使其干燥,尽快固定处理.*组织块不易过大过厚,必须小于2cmx1.5cmx0.3cm,尤其是组织块厚度须保持在0.3cm以内.*固定剂必须有足够的量,在体积上一般大于组织20倍。*组织固定后,应充分水洗,去除固定剂,

7、以减少固定剂造成的人为假像.本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!载玻片处理*组织切片冰冻切片切片厚度一般为6μm,神经组织的研究要求切片厚度在20-100μm最突出的优点是能够较好地保存多种抗原的免疫活性,尤其是细胞表面抗原(如膜受体)更应采用冰冻切片.冰冻时注意减少冰晶形成.石蜡切片其优点是组织结构保存良好,在病理和回顾性研究中有较大的实用价值,能连续切片,组织结构清晰,抗原定位准确.振动切片用振动切片机(Vibratome),对新鲜组织切片,组织不用

8、固定和冰冻,也没有石蜡包埋.本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!免疫组织化学方法免疫荧光组织化学免疫酶组织化学免疫荧光组织化学是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗体标记上荧光素，再用这种荧光抗体作为探针检测细胞内相应的抗原。(一)免疫荧光组织化学由于免疫组织化学的特异性、快速性和在细胞水平定位的敏感性与准确性，免疫荧光组织化学是免疫组织化学中广泛应用于受体定位的技术之一本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗