十三 经皮渗透试验

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1、沈阳药科大学实验十三经皮渗透试验药剂学专论实验实验十三经皮渗透试验一、实验目的1．掌握体外药物经皮渗透实验的方法。2．熟悉药物经皮渗透实验中数据的处理方法。3．了解经皮渗透实验中所用皮肤的处理方法.。二、实验指导药物通过皮肤（或人工膜）渗透的体外实验是经皮给药系统开发的必不可少的研究步骤，它可以预测药物经皮吸收的速度，研究介质、处方组成和经皮吸收促进剂等对药物经皮速度的影响，是药物经皮制剂有效性和安全性的前提保障。药物经皮渗透实验是将剥离的皮肤（或人工膜）夹在扩散池中，角质层面向给药池；将药物置于给药池中。于给定的时间间隔测定皮肤另一侧接受池内的介质中药物浓度，分析药物

2、经皮肤渗透的动力学。皮肤由角质层、表皮、真皮、皮下组织等组成。药物置于皮肤表面后向皮肤内渗透,通过表皮达到真皮,由于真皮内有丰富的毛细血管,药物能很快吸收进入体循环,因此药物在皮肤内表面的浓度很低,即符合所谓"漏槽"条件,药物的浓度接近于零。在体外实验条件下,如果置于皮肤表面的药物浓度保持不变,而接受介质中的药物满足漏槽条件，即接受池中的药物浓度远远小于给药池中的药物浓度。如果以t时刻药物通过皮肤的累积量M对时间作图，则在达到稳态后可以得到一条直线，直线的斜率为药物的稳态流量（稳态经皮吸收速度）。为了处理问题的简单化，可以将皮肤可看作简单的膜，用Fick扩散定律分析药物

3、在皮肤内的渗透行为，药物的稳态流量J与皮肤中的药物浓度梯度呈正比，可以用下式表示：dMDKJ=A=A(C−C)（1）Otdth式中A—为药物的有效扩散面积；D—为药物在皮肤中的扩散系数；K—为药物在皮肤/介质中的分配系数；h—药物在皮肤中的扩散路径；CO—给药池中药物的浓度；Ct—t时刻接受池中药物的浓度。如果接受池中的药物浓度远远小于给药池中的药物浓度，即CO>>Ct，式（1）则可以改写为59沈阳药科大学实验十三经皮渗透试验药剂学专论实验dMDKJ=A=AC（2）Odth所以对于特定的皮肤和介质来说，D、K和h均为常数，所以可以令Dk=p,称h渗透系数。式（2）可写作

4、：J=APC（3）O渗透系数是扩散阻力的倒数,单位为cm/s或cm/h,其大小由皮肤与药物的性质决定,即由D、K和h所决定，而与药物浓度无关,P值大，表示药物容易透过皮肤。根据求得的稳态流量、给药池中药物的浓度和有效扩散面积，可以求出药物经皮渗透系数M-t曲线中的直线部分反向延长线与时间轴的交点处的时间称为滞后时间（简称时滞TL），2hT=(4)L6D经皮渗透实验所用的皮肤除人的皮肤外，常用一些动物，如猴、乳猪、无毛小鼠、豚鼠和大鼠等动物皮肤。实验装置可以是单室、双室或流通扩散池。常用的接受介质是pH7.4的磷酸缓冲液和生理盐水，有时为增加药物溶解度，可采用一定浓度不影

5、响皮肤渗透性的非水溶剂。三、实验内容与操作(一)水杨酸溶解度的测定1．饱和溶液的制备：取100ml的锥形瓶，放置在32℃恒温水浴中，加入1g研细的水杨酸与100ml煮沸放冷至室温的蒸馏水，用磁力搅拌器不断搅拌，分别与0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3h取样，过滤，弃去初滤液，取续滤液测定水杨酸浓度。如最后二次测得的浓度相同，即可计算该室温条件下水杨酸的溶解度；反之，还需继续搅拌，直至溶液浓度不再增大为止。2．标准曲线绘制：精密称取水杨酸适量，配制成浓度为10、20、40、50、80、100μg/ml的标准溶液，分别精密量取5ml，加硫酸铁铵显色剂1ml，以蒸馏水

6、5ml加硫酸铁铵显色剂1ml为空白，于530nm的波长出测定吸收度，将吸收度对水杨酸浓度回归得标准曲线方程。60沈阳药科大学实验十三经皮渗透试验药剂学专论实验3．硫酸铁铵显色剂配制：称取8g硫酸铁铵溶于100ml蒸馏水中，取2ml加1mol/LHCL1ml，加蒸馏水至100ml即得（本品需新鲜配制）。4．水杨酸浓度的测定：取过滤后的水杨酸饱和溶液用蒸馏水稀释100倍，取稀释液5ml加硫酸铁铵显色剂1ml，于530nm的波长处测定吸收度，用标准曲线计算水杨酸浓度，乘以稀释倍数即得水杨酸在室温下的溶解度。（二）水杨酸的经皮渗透：1．皮肤的处理取体重为150～200g的雄性大

7、鼠，脱臼处死后立即电动剪毛刀剪去腹部皮肤毛，剥离去毛部位皮肤，去除皮下组织后用生理盐水冲洗干净，置于生理盐水中浸泡约30min，取出，用滤纸吸干，备用。1．皮渗透实验将处理好的鼠皮置于水平扩散池的两个半池之间，用夹子固定好。角质层面向的半池为给药池，真皮面向的半池为接受池。接受池中加入生理盐水10ml，给药池加入水杨酸的饱和水溶液或30％乙醇中的饱和溶液10ml，并分别在两个半池中加入小搅拌子。夹层通32°C的水，在持续搅拌下，于0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0h于接受池中取样，取样体积为8ml，并立即加入新