草乌炮制前后成分及抗炎和毒理作用的比较

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1、草乌炮制前后成分及抗炎和毒理作用的比较吴鹏摘要：本实验主要探讨了草乌生品和制品中生物碱含量的变化，以及炮制前后抗炎作用和毒性的变化。关键词：草乌，生物碱，抗炎，毒理。草乌为毛茛科植物北乌头AconitumkusnezoffiiReichb.的干燥块根。性味辛、苦，热，有大毒。归心、肝、肾、脾经。主要功效为祛风湿，温经止痛，主要用于风寒湿痹；心腹冷痛，寒疝疼痛；跌打损伤，麻醉止痛。毒性较大，内服应炮制用，且宜先煎、久煎。1草乌炮制前后的成分变化1.1实验材料和仪器三号筛、容量瓶（5ml、25ml）、电子分析天平（1/10000）、具塞锥形瓶（50ml）、移液管（1ml、25ml）、100

2、ml烧杯、超声处理机（功率500W，频率400Hz）、电子秤、漏斗、脱脂棉、旋转蒸发仪、高效液相色谱仪（美国Waters公司）；草乌生品。1.2实验步骤1.2.1草乌的生品和制品粉末的制备取净草乌，大小分档，用水浸泡至内无干心，取出，加水煮至取大个切开内无白心，口尝微有麻舌感时，取出，晾至六成干，切薄片，干燥。取生草乌和制草乌饮片，真空干燥箱中至恒重后粉碎，过三号筛，备用。1.2.2对照品溶液的制备乌头碱对照品溶液：取乌头碱对照品适量，精密称定，加异丙醇-三氯甲烷（1:1）混合溶液制成每1ml含乌头碱0.3102mg的溶液，过0.45μm微孔滤膜，即得。苯甲酰乌头碱对照品溶液：取苯甲酰

3、乌头碱对照品适量，精密称定，加异丙醇-三氯甲烷（1:1）混合溶液制成每1ml含苯甲酰乌头碱0.0203mg，0.45μm微孔滤膜，即得。1.2.3供试品溶液的制备取生草乌、制草乌粉末（过三号筛）各约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氨试液1ml，精密加入异丙醇-乙酸乙酯（1:1）混合溶液25ml，称定重量，超声处理（功率500W，频率40Hz；水温在25℃以下）15min，放冷，再称定重量，用上述溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液15ml，40℃以下减压回收溶剂至干，残渣精密加入异丙醇-三氯甲烷（1:1）混合溶液5ml溶解，取1ml，2500-3000n/min离心5min

4、，取上清液，即得。1.2.3进样测定色谱条件：以十八烷基键合硅胶为填充剂；柱温：30℃；以乙腈-四氢呋喃（25:15）为流动相A，以0.1mol/L醋酸铵溶液（每1000ml加冰醋酸0.5ml）为流动相B，按下表所示进行梯度洗脱；检测波长为235nm；进样量：10μl；理论塔板数分别按乌头碱峰和苯甲酰乌头碱峰计算，应均不低于2000。时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）0-4848-48.148.1-5858-6515→2626→353535→1585→7474→656565→851.2.4实验数据处理试样A乌头碱A苯甲酰乌头碱C乌头碱（mg/ml）C苯甲酰乌头碱(mg/ml)乌头

5、碱对照品36427110.3102苯甲酰乌头碱对照品2123880.0203生品1585816316966600.49890.1322生品2634069112569450.53990.1201制品11436742983970.01220.0285制品21101482916130.00940.0279结论：炮制过后，草乌中的乌头碱和苯甲酰乌头碱含量明显下降。2草乌炮制前后抗炎及毒理作用比较2.1实验材料和器械草乌生品、制品，生理盐水，阿司匹林，二甲苯；锅，电磁炉，灌胃针，手术剪，打孔器，榔头，手术板,ICR小鼠。2.2样品提取分别取生制草乌15g，煎煮两次，第一次加8倍水煎煮30min，

6、第二次加6倍水煎煮20min，合并煎液，浓缩至没ml含生药0.3g，即50ml，即得生制品水煎液。2.3抗炎实验2.3.1实验步骤取ICR小鼠，并禁食不禁水一天，随机分成6组，每组3只，按组分别灌胃生理盐水，4mg/10g阿司匹林药液，生品6mg/10g,生品12mg/10g，制品6mg/10g，制品12mg/10g，给药两次，分隔4小时。第二次给药30min后，在小鼠右耳涂布致炎剂二甲苯50μl/只，左耳不作任何处理，30min后处死小鼠，沿耳廓基线剪下双耳，用6mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片，即时称重，计算肿胀度，以及给药组的肿胀抑制率。2.3.2实验数据与处理组别给药量m

7、g/10g左耳重/g右耳重/g肿胀度/%平均肿胀度/%肿胀抑制率/%0.01090.020487.2生理盐水0.01180.0236100.084.7±16.69--0.01270.021266.940.01250.015020.0阿司匹林40.01250.020664.835.9±35.4957.640.01230.015122.860.01270.017840.2生品60.01360.024680.967.2±33.0720.760.011