《HPV型别检测》PPT课件

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1、HPV检测在宫颈癌诊治中的应用胡飞红在2003年，香港天后级艺人，梅艳芳身患癌症，在她刚刚过完40岁生日后离开人世宫颈癌与HPV关系豪森，德国人，2008年10月诺贝尔奖获得者研究了人乳头状瘤病毒与宫颈癌的关系HPV型别与宫颈病变HPV病毒通过皮肤表面的微小创口侵入更多的HPV病毒侵入到创口周围组织并进入上皮细胞病毒复制HPV检测在宫颈癌诊治中的临床意义CIN治疗后，宫颈癌手术后的随访筛查宫颈癌高发人群：协助诊断早期宫颈癌和癌前病变：科学研究指导（疫苗）常用HPV检测方法的分析1.细胞学检查2.组织学检查3感染组织中HPV蛋白的检测；3HPV感

2、染的血清学检查5.HPV基因组检测.1.细胞学检查传统巴氏涂片（CV）液基薄层细胞学技术(TCT)2.组织学检查（肉眼观察。阴道镜观察。组织检查）3.感染组织中HPV蛋白的检测4.HPV感染的血清学检查检测人体血清中是否存在有针对HPV产生的抗体，通过免疫学方法进行检测。检测人体血清中是否存在有针对HPV产生的抗体，通过免疫学方法进行检测。HPV基因检测5.HPV基因组检测1.基于PCR靶向扩增2.基于PCR产物分析,杂交分析型特异PCR用型特异PCR引物-设计成能特定扩增单个HPV基因型。一个PCR反应仅能检测一种型别通用引物PCR依据不同HP

3、V亚型用共同保守序列的特点合成通用引物，对HPV广谱扩增E6，E7特异引物阳性率远高于用L1区通用引物实时荧光定量PCR普通PCR的基础上增添了荧光探针，，常用通用引物，仅多定量功能。目前两通用探针可检测40多种型别。1。基于PCR靶向扩增（1）直接测序法对PCR产物的一对引物间序列进行测序实现HPV型别，避免了杂交固有的交叉反应。特别对少见型和新型别作用大，但多重感染影响测序准确度，病毒载量少者易被忽略。（2）限制性片段长度多态性分析选择合适的限制性核酸内切酶，据特定酶切电泳条带模式判断型别。可检测具体型别，但对特异性要求高，非特异性性条带可致

4、酶切后分型不准确。2.基于PCR产物分析（1）杂交捕获法杂交捕获(hybridcapturesystem，HCS)实验是美国Digene公司新发展的一种检测HPVDNA的技术，其原理是利用对抗体捕获信号的放大和化学发光信号的检测。敏感性好，重复性高，不存在交叉杂交问题。（2）反向杂交法有线性平行杂交，点杂交，反向线性杂交。常用于HPV型别分布的统计研究中。（3）以聚笨乙稀磁铁珠为载体的多重HPV分型方法杂交载体是磁珠，通用引物行广谱扩增，加入变性剂，产物解为单链，与磁珠上型别特异性探针杂交反应。2.基于PCR产物杂交分析（4）基因芯片技术杂交捕获

5、法杂交捕获一代（HC-Ⅰ)试验可检测9种高危型HPV,包括16、18、31、33、35、45、51、52和56。所用的反应载体是试管；杂交捕获二代试验(HC－Ⅱ)原来的试管法改为96孔平板法，能同时检测13种高危型HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68)。杂交捕获法捕获杂交法（通过对病毒DNA解链,杂交捕获,光信号放大获取结果）基本实验步骤如下：1.样本DNA双链被释放并分解为核苷酸单链;2.DNA单链与RNA探针结合为RNA－DNA杂交体;3.特异性抗体将RNA－DNA杂交体固定在试管壁或微孔壁上;

6、4.结合有碱性磷酸酶的多个第二抗体与RNA－DNA杂交体结合,使信号放大;5.碱性磷酸酶使酶底物发光,判读光的强弱可确定碱性磷酸酶的含量,从而确定RNA－DNA杂交体的含量。HCII唯一通过FDA批准可在临床使用的HPV技术DNA裂解→RNA-DNA杂交→抗体捕获→化学发光→计算机判读新发展的一项诊断技术，在HPV分型中用寡核苷酸原位合成法，原理是将疾病的特征性基因片段或致病病原体片段固定芯片上，制成诊断芯片，提取患者样本中核酸行标记作探针，利用探针与芯片杂交，扫描杂交结果，判断基因型分型是否被感染，可诊断HPV潜在感染，行早期预防基因芯片技术H

7、PV基因芯片检测敏感性高、特异性强、检测结果准确可靠检测灵敏度是PCR方法的100倍针对性强：对样品中的HPV-DNA直接进行检测。检出HPV的潜伏期感染，克服了血清学及免疫组化检测法对潜伏感染会产生漏检的缺点（实现对疾病的早期快速诊断）操作简单：通过1次杂交检测不仅可以判断待检样品中是否存在HPV感染，而且可以鉴定出是哪种型别的HPV感染同时检测多种HPV型别，对多重HPV.感染的判断一目了然，克服了其他HPV.检测方法难以判断混合感染或操作烦琐的缺点。总结。总之，目前的HPV分型检测技术主要基于聚合酶链反应。HPV特定型别在宫颈疾病发展中的重

8、要作用，考虑到HPV型谱的多样性和多重性HPV联合感染的高发率，准确的HPV检测显得尤为重要。不断寻求更准确，快速有效的检测技术。注：如