Mic06微生物感染的实验室诊断

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1、北京大学医学部PekingUniversityHealthScienceCenter微生物感染的实验室诊断LaboratorydiagnosisofmicroorganisminfectionMedicalMicrobiologyExcellentCurriculum精品课程医学微生物学北京大学医学部病原生物学系邹清华P157实验室诊断的意义明确患者的临床诊断选择有效的治疗措施预防疾病继续传播与流行判断患者预后实验室诊断方法分类镜下直接观察病原微生物分离、培养和鉴定病原微生物的抗原检测特异性RNA或DNA片段检测抗体和细胞免疫指征的检测样本的采集、运输、样本前期处理形

2、态学、免疫学、生物化学、分子生物学和生物学等方法检查出病原微生物及其型别动物实验、细菌毒素检测和药物敏感性实验细菌感染的实验室诊断采集操作：无菌操作，做好标记采集部位：组织、血、尿液、粪便、痰、脑脊液、分泌物、呕吐物、胸腹穿刺物及解剖样品等采集时机：根据病程发展的不同阶段采集不同部位的样品运输：应遵循安全、快捷的原则前期处理：浓缩标本采集和运送形态学检查细菌的培养特征观察：颜色、气味、溶血性、菌落形态、细菌动力及在液体、半固体、固体培养基中的生长状态显微镜检查法：形态、基本结构、染色性、排列方式、数量非染色检查法染色检查法负染色检查法细菌分离培养法临床标本细菌分离：分

3、区划线细菌培养挑取单菌落，纯培养鉴定细菌感染的实验室诊断程序免疫学检查免疫沉淀反应凝集反应补体结合试验免疫标记技术生物化学检查糖代谢试验糖发酵试验甲基红试验V-P试验蛋白质代谢试验硫化氢产生试验尿素分解试验碳源和氮源利用试验枸橼酸盐利用试验呼吸酶类试验过氧化氢酶试验氧化酶试验分子生物学检查G+C测定技术核酸杂交技术聚合酶链反应技术质粒指纹图谱技术蛋白质芯片技术DNA芯片技术生物学检查噬菌体裂解试验细菌素分型技术抗菌谱试验动物实验及细菌毒素检测小鼠豚鼠家兔*LD50*ID50药物敏感性试验纸片扩散法液体稀释法E测定法(Etest)自动化药敏测定法耐药基因测定法病毒感染的

4、实验室诊断标本的采集和送检标本采集部位：鼻咽分泌液或痰液、脑脊液、粪便、血液标本采集时间发病早期或急性期标本运送对热不稳定，装有冰块或干冰的容器内立即送检加入青霉素、链霉素等抗生素，抑制细菌和真菌生长形态学检查光学显微镜检查包涵体（inclusion）：某些病毒感染宿主细胞后,可在细胞核或浆内出现一个或数个、呈圆形或不规则、大小不一、嗜酸性或嗜碱性的结构电镜检查直接电镜法免疫电镜法轮状病毒负染的电镜照片病毒分离和培养动物接种小白鼠、大白鼠、豚鼠、兔、鸡、猴，采用鼻腔、脑内、皮下、皮内、腹腔、静脉等方式鸡胚培养组织培养器官培养组织培养细胞培养原代细胞培养：2~3代用于诊

5、断和疫苗制备二倍体细胞培养：40±10代传代细胞培养：无限传代用于分离多种病毒，但不能用于制备疫苗绒毛尿囊膜接种（痘病毒单纯疱疹病毒）卵黄囊接种（虫媒病毒）羊膜腔接种（流感病毒初次分离）尿囊腔接种（流感病毒、腮腺炎病毒）气室病毒生长繁殖的指标与鉴定细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)红细胞吸附红细胞凝集干扰作用细胞代谢反应空斑形成单位（PFU）细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)培养的单层细胞接种病毒后导致细胞发生圆缩、溶解、脱落等病变的现象。病变细胞正常细胞redbloodcell红细胞吸附virus+susceptiblec

6、ells+viralproteinsexpressedonthecellmembraneredbloodcell红细胞凝集virus+susceptiblecells+virusesreleasedfromthecellsvirusA+susceptiblecellsvirusB+CPE(-)virusB+CPE(+)susceptiblecells病毒干扰作用空斑plaque由病毒感染细胞后在培养瓶的琼脂层上形成的一个坏死病灶空斑形成单位PFU(plaqueformationunit)每毫升空斑形成单位病毒蛋白的检测SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳免疫荧光技术酶免疫技术固

7、相放射免疫技术蛋白印记分析EnzymeImmunoAssay(EIA)Ex.SandwichimmunoassayAgAb病毒核酸的检测核酸分子杂交技术核酸分子扩增技术基因芯片技术血清学诊断补体结合试验中和试验血凝抑制试验胶乳凝集试验间接血凝试验酶联免疫吸附试验CPEPFU熟悉微生物检测的常用方法掌握病原菌分离鉴定步骤，并能根据待检标本设计检测程序掌握病毒分离培养的鸡胚培养方法Summary