ABI荧光定量PCR中文说明书与培训资料ABIPrism7300安装培训

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1、ABIPrism7300/7500实时定量PCR仪用户培训讲义美国应用生物系统中国公司广州代表处2005年用户培训流程：4、报修请拨打全国的维护中心电话：8008100192。1、安装完毕，工程师按照SOP培训仪器和软件的操作；2、具备一定经验的用户，建议参加AB公司的培训班，接受应用及故障排除培训；培训班在北京、上海、广州等地定期举行，每台仪器有两个免费名额；培训班日程表每半年更新一次，可以到AB公司的网站上查询：www.appliedbiosystems.com.cn。3、鼓励用户与AB公司的应用专家直接联系，协商进行

2、现场标准品和未知样品的实验培训；AB产品线的联系方法：陈云地：021-64736366-407，8008203939chenyd@appliedbiosystems.com培训内容定量PCR的化学原理传统PCR的过程：三个步骤一、变性：DNA双链结构被分开；94ºC-96ºC二、复性：引物结合到DNA链上；40ºC-65ºC三、延伸：新DNA合成。72ºC传统PCR的过程：24816传统的检测方法使用的是“终点法”：即在反映完成以后再进行检测，如跑胶。传统PCR的检测方法：实时荧光定量PCR实时每个循环进行测量。荧光在反应

3、体系中加入某些荧光物质，荧光物质所发出的信号的强度与体系中的DNA的多少有一定的对应关系，并且信号强度能随着体系中的DNA浓度的改变而改变。PCR类似于传统的PCR。入射光染料分子出射光荧光物质在接受了外界光的照射后，能够向外发射波长比入射光长的光探针法：HighEnergymoleculeLowenergymolecule能量不同的两个染料分子在空间距离上很接近时，在受到外界光照射的时候，能量高的分子就会将吸收到的能量转移至能量低的分子，使本身能量降低。由于本身能量已经降低，高能的分子就不会向外发光，所以，对于高能分子来

4、说，光就好像是被淬灭了一样。能量转移：探针法：HighEnergymoleculeLowenergymolecule探针法：当两个染料分子在空间位置上距离很远时，能量高的分子所吸收的能量就不能转移至能量低的分子上，这样，两个分子就会各自向外发出自己特定波长的光。探针：一段DNA序列，能完全跟实验的目标DNA中的一段互补，两端标上染料分子。探针法：每产生一个新的片段，就产生一个荧光分子探针法：1248荧光值的不断增加，代表着体系里面的DNA量越来越多。染料法：染料法的优缺点：实时定量PCR的结果计算所有的样品里的DNA的量都

5、是在按每个循环两倍的速度增加；当所有的样品的报告荧光的强度都达到某一个数值时，各个样品所经历过的循环数与样品的起始浓度有关，起始浓度越高，所经历的循环次数越少。未知样品1：未知样品2：已知浓度的样品1：已知浓度的样品2：已知浓度的样品3：已知浓度的样品4：已知浓度的样品5：1250250050001000020000？？各个样品的荧光值都达到“200000”时所经过的循环数：14151617181517浓度例子：循环数浓度lg1250lg2500lg5000lg10000lg20000141516171815lg10000

6、17lg2500例子：通过标准曲线，我们可以算出未知样品的起始浓度是：未知样品1：未知样品2：2500100001517例子：ABIPrism73007300的功能一览：光源入射光滤光片半透镜样品架四色滤光片组检测器7300光路图光源入射光滤光片半透镜样品架五色滤光片组检测器7500光路图7300选用的荧光组合每个循环，仪器都会对透过四个滤光片的能量进行读数，得到原始数据：电脑对原始数据进行处理，得到各种颜色的光的信号强度数据：Ct定义好了基线的start和endcycle，threshold后，软件对每个样品进行分析，得

7、到了各个样品的Ct值。线性图谱：对数图谱：基线期指数增长期线性增长期平台期根据标准样品的Ct值和对应的浓度，软件自动给出标准曲线：对于使用SybrGreen的样品，软件有进行解链分析的能力。