细胞凋亡形态学检测与观察

《细胞凋亡形态学检测与观察》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、中国试剂网3.8.4.3细胞凋亡形态学检测与观察hoechst33258染色，他们认为细胞发生凋亡时，染色质会固缩。所以Hoechst染色时，细胞核会呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。正常细胞核刺激后有致密浓染的凋亡细胞AO-EB染色法：Theimagebelowshowshumanlymphomacellstreatedwiththechemotherapyagentcamptothecin.Thecellsthatareundergoingapoptosisappearyellowandshowthecharacteristicmembraneblebbing(

2、bubbleformation)seenincellsdyingviaapoptosis.中国试剂网3.8.4.3Promega公司的DeadEnd™比色法细胞凋亡检测系统能标记片断化的DNA，而这种片段化的DNA被视为是细胞凋亡的典型生化特征之一。DeadEnd™比色法细胞凋亡检测系统是一种在组织切片与培养细胞中标记凋亡细胞核的理想方法，与此同时，还可以做形态学上的评估。本文中，将展示此种方法在细胞凋亡的原位细胞,动物模型及多种病理学组织切片中的应用。实验流程：中国试剂网3.8.4.3结果：抗Fas单克隆抗体（50ng/ml;克隆CH-11,Oncor）诱导的J

3、urkat细胞的细胞凋亡。DeadEnd™比色法细胞凋亡检测系统标记Fas单克隆抗体处理过的细胞核（16小时），而未处理过的则未被染色(右下角插图)。凋亡的人类角化细胞被多聚甲醛固定，被荧光素标记的刀豆蛋白A染色。然后经丙酮渗透处理，被pi染色后能被共聚焦显微镜观察。本片显示的绿色荧光（外源性凝集素）勾勒出凋亡细胞表面的小泡，红色荧光（pi）被包被在其中。10µM喜树碱诱导的Jurkatcells（慢淋。G1检测点缺陷细胞）凋亡。细胞然后经VybrantApoptosisAssayKit#4(V13243).处理。凋亡细胞核被YO-PRO-1绿染，坏死细胞被pi红

4、染。中国试剂网3.8.4.3Jurkat人类白血病T细胞经1微升喜树碱处理，ps外翻，早期凋亡特异性的特征被annexin－5检测到。晚期凋亡和坏死细胞被pi染色。本图是由相应的荧光滤光片获取的。HL-60cells（急粒，p53缺陷）被喜树碱诱导3小时。DNA段端被荧光标记的脱氧核苷酸末端转移酶标记。中国试剂网3.8.4.3DetectionofapoptosisinSK-N-MCneuroblastomacells.Followingasix-hourexposuretohydrogenperoxide,cellswerelabeledwithHoechst3

5、3342(H1399,H3570,H21492),tetramethylrhodamineethylester(TMRE,T669)andrhodamine110,bis-L-asparticacidamide(R22122)for15minutes.Apoptoticcellsshowgreencytosolicfluorescenceresultingfromcleavageoftherhodamine110,bis-L-asparticacidamidesubstratebyactivecaspase-3.ThestainingpatternoftheHoe

6、chst33342dyerevealsthatthemajorityoftherhodamine110–positivecellsalsocontaincondensedorfragmentednucleicharacteristicofapoptosis.Furthermore,therhodamine110–positivecellsarealsocharacterizedbyanabsenceofpolarizedmitochondria,asindicatedbytheirfailuretoloadthepositivelychargedmitochond

7、rialindicatorTMRE.TheimagewascontributedbyA.K.StoutandJ.T.Greenamyre,EmoryUniversity.线虫发育中细胞的凋亡：用共聚焦显微镜观察线虫胚胎，在正常胚胎ＣＥＤ－４位于线粒体。而凋亡细胞ＣＥＤ－４（红色）和核纤层蛋白（绿色）在核被膜（黄色）均可见。该实验有助于揭示，在细胞凋亡中ＣＥＤ－４从线粒体易位到核被膜(1)形态学特征：发生时首先是染色质的凝集,嗜碱性染色增强,然后细胞核崩解此中国试剂网3.8.4.3时线粒体保持形态正常。最后细胞体积缩小，一部分细胞质和核碎片进入由膜包被的程序死亡小体

8、，他们从细