实验一 量校关系曲线的测定

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1、实验一量校关系曲线的测定一目的1用宼氏法测定LD50和95%可信限。2计算LD50。3理解其药理学意义。二原理药物给药剂量与动物死亡率间呈正态分布，以对数剂量为横坐标、死亡率为纵坐标作图，可得到一对称S型曲线，其两端较平坦，中间较陡，说明两端处剂量稍有变化时死亡率的改变不易表现出来，在50%死亡率处斜率最大，该处剂量稍有变动时，其死亡率变动最明显，即最灵敏，在技术上也最容易测得准确，所以人们常选用LD50值作为反映药物的指标。若将死亡率换算成机率单位，则对数剂量与机率单位呈直线关系，用数学方法可拟合其回归方程式，可精确地计算

2、LD50及引起任何死亡率的剂量及相关数据。三实验材料1实验动物18～22g健康小白鼠50只（正式实验），雌雄各半（雌鼠应无孕），实验前禁食12h，不禁水。2器材与药品注射器（1ml）、电子天平、小鼠笼、苦味酸、品红、甲基紫、戊巴比妥钠。四试验方法1预备试验用少量动物9～12只，分3～4组，逐步摸索出是全部动物死亡的最小剂量LD100和一个动物也不死亡的最大剂量LD0，至少应找出引起20%～80%死亡率的剂量范围，以保证量-效曲线跨越足够的范围。一般选组数5~8组，组距i大小主要取决于实验动物对被试因素的敏感性，一般要求i应小

3、于0.155，多在0.08~0.1之间。戊巴比妥钠小鼠腹腔注射（ip）引起0%和100%动物死亡的剂量范围的参考值以测得：最小剂量（Dmin）76.0mg/kg，最大剂量（Dmax）187.5mg/kg。2正式实验（1）小白鼠的选取与分组取小白鼠50只，将小鼠雌、雄分开。分别称重，标记小鼠（雌黄，雄红）。雌、雄小鼠分别按重量顺序分层随机分为5组，使不同性别和体重的小鼠能均匀分配于各组，每组10只。（2）药液配制按等比稀释法配制药液最高浓度药液（母液）的配制小鼠腹腔注射体积为0.2ml/10g=20ml/kg，每组药液量为4m

4、l左右，为留有余地，各组动物所需药液体积定为6ml。由预备实验可知，最大剂量（Dmax）187.5mg/kg，换算成质量体积比为9.38mg/ml。故得母液所需药量M=V’*9.389.38mg/ml=281.25mg。281.25mg药品加适量生理盐水，定容至30ml，混匀→第一组取6ml，剩余24ml再定容至30ml，混匀→第二组取6ml。以次取至第五组。（3）给药各组动物分别腹腔注射相应浓度的药液0.2ml/10g，开始15min内严密观察，以呼吸停止为指标，准确结果为24h内的死亡数。五结果组别动物数剂量对数剂量死亡

5、数死亡率存活率（只）（mg/kg）（只）110187.52.2730880%20%210150.02.174910100%0%310120.02.0768550%50%41095.01.978700%100%51076.01.880800%100%确定组距i：把上下限的剂量换算成对数值，设上限剂量的对数值为Xm，下限剂量的对数值为Xn，组数为n，则：i＝（Xm-Xn）/（n-1）。得i=0.0981确定各组剂量：由Xn逐次加i（或由Xm逐次减i），得出各组剂量的对数值，再分别查反对数，即得出各组剂量（呈等比级数排列）。由最高

6、死亡率100%可确定LD50的计算公式（基本公式）：LD50=lg-1[Xm-i(ΣP-0.5)]ΣP为各组死亡率之和。得LD50=124.9mg/kgLD50的95%可信限的计算公式=lg-1(lgLD50±1.96×Sx50)其中Sx50公式得Sx50=0.028。得LD50的95%可信限为110.2~141.9mg/kg。六讨论1数据处理：由于本实验课实验参与人数较多，存在较大的误差，尤其是1组与2组的实验数据，因此，求LD50中的最大致死量剂量仍为1组的剂量。2随机性：实验中能控制的因素尽量使之均衡化，难以控制的因素

7、也应力求严格随机化。分组时应先将不同性别分开，再将不同体重分开，然后随机分配，此法称为分层随机分组法。（2）剂量按几何级数排列，转换为对数后，剂间为等距，便于计算结果，估计误差。相邻高低剂量之比一般为1:0.6～1:0.85，剂距小，结果较精确，但过小易出现反应率颠倒的情况。剂距的大小也与给药途径有关，静脉给药时，剂距可偏小，灌胃给药时可适当偏大。（3）药物及给药途径应以静脉注射、腹腔注射和灌胃给药为主，选取的途径必须包括推荐临床给药途径。（4）LD50受试验中多种因素的影响，如动物的品系、性别、年龄、饥饱以及环境因素中室温

8、、湿度、光照、时辰（上、下午）等。当进行两药的毒性比较时，应尽可能在相同条件下进行，以减少抽样误差。（5）在试验过程中应详细记动物的中毒症状及可能致死原因，必要时解剖死亡动物肉眼观察，如发现有组织病变时，可进行组织学检查，通常动物死亡多出现在给药后1～2日内，但全部试验应观察7日以上，如遇