紫薇的组织培养实验

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1、紫薇的组织培养实验10园林技术1-2班二班第一组组员：储海云褚琴梅董红侠高小丽耿蒙蒙袁露露一培养基的配置与灭菌1实验目的：学习并掌握MS培养基的配制和灭菌过程。2实验原理：培养基是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般含碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水等,通常采用母液法配制。培养基含有植物生长所必需的各类营养物质，也是各种细菌、真菌滋生繁殖的极好场所，因此必需对培养基进行灭菌处理，确保无菌操作的顺利进行。3实验材料、试剂和仪器设备1.试剂：琼脂，蔗糖，蒸馏水，

2、1mol/LNaOH,1mol/LHCl,各类母液2.仪器设备：电子天平，烧杯，量筒，移液管，玻璃棒，药芍，称量纸，PH试纸，锥形瓶等。4实验步骤：4.1培养基的配制A确定配方:MS+NAA0.5mg/L+6-BA0.5mg/LB清洗玻璃器皿、用具及培养瓶C把装有母液的试剂瓶从冰箱取出，在实验台上按顺序放好D不锈钢锅里放入750ml的蒸馏水E称取琼脂8g放入锅中F加热并不断搅拌，使琼脂完全溶解G量取母液：浓缩10倍的大量元素100ml浓缩100倍的微量元素10ml浓缩100倍的铁盐母液10ml浓缩50倍的

3、有机物母液20mlNAA0.5mg/L取4ml6-BA0.5mg/L取2mlH称取蔗糖30gI定容1LJ调整PH值6.5-7之间K分装20瓶（每瓶40～45ml）4.2培养基的灭菌A高压灭菌锅先加水至水位线，再放入培养基，顺时针拧紧盖子，直到不能拧动为止B接通电源，按下工作键，当压力达到0.10Mpa时，使压力表保持0.10～0.15Mpa，灭菌30minC灭菌器蜂鸣报警时，立即断开电源，让压力自然下降。D当达到0.05Mpa时放出蒸汽，至零时，打开锅取出物品E放入冰箱保存备用二外植体的初代培养1实验目的

4、:掌握外植体灭菌、无菌操作技术的方法。2实验原理:植物组织培养是应用无菌操作的方法培养离体的植物器官或组织，甚至单个细胞的过程。如果组织培养使用的植物材料是带菌的，在接种前就必须选择合适的消毒剂对植物外植体进行表面消毒，获得无菌材料去进行组织培养，这是取得组织培养成功的最基本的前提和重要保证。3实验用具及材料：超净工作台、培养基、无菌碟、无菌水、镊子、剪刀、70%酒精、95%酒精、0.1%升汞、酒精灯4外植体的选择与灭菌①选取紫薇新稍嫩枝②去叶片，剪成3～4cm的小段③在自来水中冲洗④于无菌条件下用75%

5、酒精灭菌30～60s⑤用0.1%升汞浸泡8～10min⑥用无菌水冲洗5次⑦将材料剪成2cm带一个叶芽的茎段。5.无菌接种步骤：⑴用70%酒精擦拭工作台和双手⑵将初步洗涤及切割的材料放入烧杯，带入超净工作台上，用70%酒精灭菌8s，再用0.1%升汞灭菌，再用无菌水冲洗，最后放在滤纸上沥去水分。　⑶材料吸干后，一手拿镊子、一手拿剪刀，对材料进行适当的切剪。将茎剪成含有一个节的小段。在接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉污染。⑷用灼烧消毒过的器械将切割好的外植体插植到培养基上。具体操作过程是：先打开瓶盖，将培

6、养瓶倾斜45度拿着，使培养瓶口靠近酒精灯火焰，并将瓶口在火焰上方转动，使瓶口里外灼烧数秒钟。然后用镊子夹取一块切好的外植体送入培养瓶内，轻轻插入培养基上。茎段要正放（尖端向上），接种完后，将瓶口在火焰上再灼烧数秒钟。在酒精灯范围内盖上盖子。⑸接种结束后，将接种好的培养瓶转到培养室培养，清理和关闭超净工作台。⑹定期观察外植体初代培养情况。