生物学与免疫学检验系列实验Ⅰ

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1、伤寒杆菌感染模型的微生物学与免疫学检验系列实验Ⅰ主讲教师：王立新、张莹、潘宁辅带教师：林陵、马素霞、廖静宜东南大学基础医学院病原生物学与免疫系志贺菌属与沙门菌属志贺菌属(Shigella)：人类细菌性痢疾最为常见的病原菌通称痢疾杆菌（dysenterybacteria）沙门菌属(Salmonella)：引起肠热症----伤寒、副伤寒食物中毒败血症志贺菌有菌毛不分解乳糖无鞭毛（动力—）分解葡萄糖产酸不产气不产生H2S沙门菌有菌毛不分解乳糖周身鞭毛（动力+）分解葡萄糖产酸产气（伤寒杆菌不产气）大多产生H2S生物学性状O-Ag：LPS成分；耐热：100℃数小时不破坏0.1%石碳酸不破

2、坏TI-AgIgMH-Ag：鞭毛蛋白质；不耐热；0.1%石碳酸不破坏TD-AgIgGVi-Ag：毒力抗原（Virulence）位于菌体表面抵抗吞噬阻止O-Ag与相应Ab的体内外结合Vi-Ag抗原性弱，可作为带菌者的检测伤寒杆菌的抗原构造致病部位：大肠不侵入血流致病物质：侵袭力：菌毛粘附上皮细胞侵袭侵入结肠粘膜上皮细胞，繁殖、扩散，形态感染病灶内毒素外毒素致病部位；小肠侵入血流，引起菌血症致病物质：侵袭力鞭毛穿越小肠粘膜，达皮下组织Vi抗原抵抗吞噬细胞的杀伤内毒素致病性志贺菌沙门菌致病过程：志贺菌—痢疾粪—口传播（传染源：病人/带菌者）潜伏期10-200个细菌即使人感染1-3天突破

3、人体防御能力①胃酸②正常菌群拮抗作用③局部免疫作用（SIgA）大肠部位侵入侵袭力（菌毛）粘膜上皮细胞（其中生长繁殖，形成感染灶）释放内毒素、外毒素坏死、脱落粘膜组织局部刺激进入血流粘液、1、肠功能紊乱发热、WBC细菌、痉挛、腹痛脱水、酸中毒炎性细胞、大便次数增多微循环衰竭血液里急后重中毒性脑炎2、肠壁通透性增DIC促进毒素吸收死亡率高脓血便腹泻中毒性菌痢致病过程：志贺菌—痢疾伤寒杆菌（随食物）未被胃酸杀灭潜伏期小肠上部（以菌毛吸附在粘膜表面）穿过组织间隙（鞭毛）肠壁固有层淋巴组织，由Mφ吞噬Vi抗原抵抗杀伤，继续生长繁殖淋巴液、肠系膜淋巴组织血液第一期菌血症致病过程：伤寒杆菌—伤

4、寒初期血液第一期菌血症（病程出现乏力、头痛①血液、骨髓第1W）全身酸痛等前期症状细菌培养骨髓、肝、脾、胆、肾等脏器阳性率高被其中吞噬细菌在其昂②IgM抗OAb细胞吞噬中大量繁殖出现释放极期（病程肝肾各脏器第2、3W）胆囊再胆汁次肠道尿液血液第二期菌血症肠道尿液血液第二期菌血症刺激已致敏的释放大量①血液、粪便、肠壁淋巴组织内毒素化尿液，细菌培养可呈阳性发生Ⅳ变态反应加重全身中毒症状②血清中：导致坏死、溃疡IgGIgM粪便排出细菌尿液排出细菌血液有细菌持续高热、肝脾肿大、全身中毒症状显著，恢复期（第3W1、特异性抗体升高，作用于细胞外细菌以后）2、特异性细胞免疫加强，TD细胞释放淋巴

5、因子，激活Mφ，使其活性增强，有效杀灭Mφ内的伤寒杆菌。（TC细胞杀伤细菌感染的靶细胞？）3、抗伤寒杆菌O-Ag的抗体（IgM）：抗伤寒杆菌H-Ag的抗体（IgG）：带菌者恢复期带菌者：恢复后3周----3月长期带菌者：》3月伤寒的痊愈指针：胆囊、胆汁，细菌（L型细菌）培养阴性细菌性痢疾肠道症状：有不侵入血流全身中毒症状：中毒性痢疾血象WBC脓血粘液便，粪便是唯一的标本以局部体液免疫---SIgA为主所致疾病——临床症状的差异伤寒肠道症状：有侵入血流引起菌血症全身中毒症状：有尚影响肝、肾、脾、胆等器官。血象WBC？嗜酸性粒细胞除粪便外，血液、骨髓、尿液、胆汁均可分离到细菌

6、。以细胞免疫为主，病后获牢固免疫力微生物学检查法：伤寒杆菌沙门菌的分离与鉴定标本因病程不同采取不同标本：静脉血骨髓粪便和尿液第1周第1~3周第2周以后分离培养增菌增菌离心沉淀SS平板挑取可疑菌落鉴定KIA；MIU；血清学试验因病程不同采取不同标本原理：已知伤寒杆菌O-Ag伤寒杆菌H-Ag+病人血清甲型副伤寒杆菌H-Ag乙型副伤寒杆菌H-Ag——定量凝集——相应Ab的含量血清学试验——Widaltest血清学试验——Widaltest结果判定：正常抗体水平O凝集价＜1∶80；H凝集价＜1∶160O-AbH-Ab伤寒早期皮O-AbH-Ab伤寒急性期O-AbH-Ab伤寒恢复期O-AbH

7、-AbA：伤寒愈后期B：曾患伤寒杆菌C：预防接种疫苗D：L型细菌感染辅助诊断：A：O凝集价≥1∶80；H凝集价≥1∶160B：2次检测凝集价递增≥4倍或以上实验内容及其安排11.总体内容讲解2.伤寒杆菌感染模型建立l实验分组：1只小鼠/人l感染模型建立：灌胃接种伤寒杆菌培养液2感染小鼠标本采集与接种1.血液标本：l接种增菌培养基l分离血清，置-20度保存（肥达试验用）2.粪便标本：接种分离培养基（SS平板）3标本的细菌学检验11.血液标本：l观察生长情况（混浊等现象）l转种普通平