资源描述：
《磷酸苏氨酸裂合酶 α β-不饱和双键 加成 抑制剂 MAPKs》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、磷酸苏氨酸裂合酶论文：磷酸苏氨酸裂合酶SpvC、OspF抑制剂的设计【中文摘要】MAPK信号通路广泛存在于动植物中,是细胞内重要的信号转导途径。病原菌能通过破坏MAPK信号通路来突破动植物个体的免疫防线,进攻组织和细胞,导致疾病的发生。效应蛋白SpvC、OspF是分别由沙门氏菌和志贺氏菌分泌的毒力蛋白,通过Ⅲ型分泌系统注入到宿主细胞,不可逆灭活宿主MAPKs,破坏宿主的先天免疫防线。有研究证实,以SpvC为代表的蛋白家族是一类新的酶,称作磷酸苏氨酸裂合酶,这类裂合酶能特异的识别磷酸化的MAPKs(p-MAPKs)的进化保守“pT-X-pY”序列,并不可逆的催化该模体中的磷酸苏氨酸
2、(pT)发生β消去反应,形成α、β-不饱和双键并释放一分子游离磷酸。当使用磷酸丝氨酸(pS)代替p-MAPKs中“pT-X-pY”模体的pT时,SpvC家族的磷酸苏氨酸裂合酶也能催化其发生上述反应。更进一步的研究发现,SpvC、OspF能与这种双键结构发生加成反应而失活。基于对SpvC家族的磷酸苏氨酸裂合酶催化机制的了解,本文设计了三种磷酸苏氨酸裂合酶的不可逆多肽抑制剂。通过对其抑制效果的分析、比较,发现抑制剂Erk5-△S对SpvC、OspF活性的最大抑制程度分别为80%和40%,IC50值分别为200...【英文摘要】MAPKsignalingpathwayexistinbo
3、thanimalandplantgenerally,andisimportantpathwayofsignaltransduction.PathogenicbacteriacanbreakthroughtheimmunitylineofdefensebydisturbingMAPKpathwaytoattacktissueandcellresultinginpathema,sometimesseriously.SpvCfromnontyphoidSalmonellaspeciesandOspFfromShigellaspp.arebothvirulenceproteins,and
4、injectedintohostcellbytypeIIIsecretionsystem(TTSS)toinactivatetheirhostMAPKsirreversiblyanddestroythedefenseofinnate...【关键词】磷酸苏氨酸裂合酶αβ-不饱和双键加成抑制剂MAPKs【英文关键词】phosphothreoninelyaseαβ-unsaturateddoublebondMichaeladditioninhibitorMAPKs【索购全文】联系Q1：138113721Q2：139938848【目录】磷酸苏氨酸裂合酶SpvC、OspF抑制剂的设计摘要4
5、-5ABSTRACT5-6前言9-261、研究背景及意义9-102、MAPK信号通路10-123、Ⅲ型分泌系统（TypeIIISecretionsystem）12-134、OspF家族（包括SpvC）磷酸苏氨酸裂合酶的催化机制13-165、酶的抑制作用16-176、pET-SUMO及pGEx-6蛋白表达系统17-207、反相-HPLC简介20-218、基因的定点诱变21-239、蛋白的纯化23-26第一章目的基因的克隆、蛋白的表达及纯化26-481.1引言与实验设计261.1.1引言261.1.2实验设计261.2实验原理26-271.3基因的克隆27-391.3.1实验材料27
6、-301.3.2基因克隆所需仪器30-311.3.3实验方法31-391.4蛋白的大量表达及纯化（4℃层析柜）39-431.4.1实验材料39-401.4.2蛋白纯化所需仪器40-411.4.3实验方法41-431.5结果与讨论43-471.5.1基因克隆的结果43-451.5.2蛋白表达及纯化结果45-471.6本章结论47-48第二章抑制剂的制备与纯化48-552.1引言482.2实验材料48-492.3实验所需仪器492.4实验方法49-512.4.1抑制剂的设计49-502.4.2磷酸化多肽的β-消去反应502.4.3RP-HPLC(反相HPLC)50-512.4.4碳碳
7、双键的鉴定512.5实验结果与分析51-542.6本章结论54-55第三章抑制剂对SpvC、OspF活性的抑制55-703.1引言553.2实验材料55-563.3实验所需仪器563.4实验方法56-633.4.1测活酶量的确定56-583.4.2酶的自然失活情况58-593.4.3抑制剂对酶活性的抑制59-623.4.4蛋白印迹western-blot62-633.5实验结果与分析63-683.6讨论68-70第四章结论70-71参考文献71-77发表论文、参加科研情况的说明7
