高速逆流色谱法分离纯化丹参并尝试制订中药指纹图谱

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1、!"卷#期生物工程学报’()*!"+(*#$%%&年!!月!"#$%&%’()*$+,(-.#(/%0"$(,(12+(,-./-0$%%&!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!高速逆流色谱法分离纯化丹参并尝试制订中药指纹图谱顾铭"欧阳藩苏志国（中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室，北京!%%%5%）摘要用国产高速逆流色谱（BCDDD）分离纯化中草药———丹参，选用正己烷1乙醇1水体系，固定相保留率达到35E5F。采用分步

2、洗脱，&个产地丹参各分离得到!$个洗脱组分，经高效液相色谱仪和紫外光谱仪检测证明&张BCDDD洗脱图谱中对应洗脱峰为同一组分。BCDDD洗脱图谱不包含非共有峰，并且对应洗脱峰保留时间的相对标准偏差GCHI&F，符合国家标准关于制订指纹图谱方法学考察资料的技术参数。因此，BCDDD作为制订指纹图谱的方法之一具有可行性。关键词高速逆流色谱（BCDDD），中药指纹图谱，丹参中图分类号G"!3文献标识码J文章编号!%%%1&%#（!$%%&）%#1%32%1%9［9］高速逆流色谱（B;>K1CL--MD(N

3、07LKP，BCDDD）是一种基于液1液多级逆流萃取离纯化丹参最多得到5种组分。本文一方面摸建立的色谱体系，没有固相载体，避免了待分离样品索分离丹参适宜的溶剂体系和仪器参数，分离得到与固相载体表面产生化学反应而变化和不可逆吸尽可能多的组分，使洗脱图谱中包含充分的化学信［!］附；高速逆流色谱可以直接纯化粗制样品；尤其适息，为制订指纹图谱打下基础；另一方面探索使用高［$］于分离极性较大的组分；BCDDD的仪器及试剂成速逆流色谱制订中药指纹图谱的

4、可行性。本明显低于高效液相色谱（B;>KQ-0R(0.707LKP，BQSD），适用于制备高纯度、高附加值的化合物。!"!仪器中药材的主要活性成分是次生代谢物，对后天!"!"!4U:1&%%半制备型高速逆流色谱仪（深圳同的生长环境依赖性很强，使得活性成分的种类和含田生化技术有限公司，中国）。聚四氟乙烯管缠绕在量因地域、气候和采收期有较大的差异，迫切要求建&个水平轴上形成螺旋管（管直径$E#..，分离体积立中药材的质量标准。中药指纹图谱是近年来被广&%%.S），进样圈$%.

5、S。高速逆流色谱配备了柱塞式泛采用的质控方法，最常用的分析手段是色谱和光泵（C系列，北京圣益通技术开发有限责任公司，中（波）谱。光谱和波谱指纹图谱由于选择性的限制，国），紫外检测仪（55$&J，北京新技术应用研究所，中不能表达中药这样的混合体系中各种不同化学成分国），记录仪（&%93型，四川记录仪器厂，中国）。浓度分布的整体状况，因此色谱指纹图谱成为首选!"!"#高效液相色谱（!%J,L系列，岛津，日本）：双［2］泵系统（SD1!%J4,L），紫外检测仪（CQH1!%J,L），柱温方法。4SD操作简便、成本低廉，但精密

6、度较差；BQSD精密度高，重现性好，适用范围较广，但需要箱（D4V1!%JC,L），系统控制器（CDS1!%J,L），控制软有严格的样品预处理，很难分析，易造成固定相吸附件（D)7@@1,L），$%!S进样圈；色谱柱：反向D!5柱的样品和高粘度的样品。因此本文提出使用高速逆（!9%..W2E#..X*H*，9）。!.流色谱（BCDDD）作为制订中药指纹图谱的方法之!"#试剂一。!"#"!高速逆流色谱试剂采用分析纯（天津化学试选用丹参作为模式物。丹参具有活血通经、去剂一厂）。水是通过反渗透Y;);1Z（!5Y"，Y;))

7、;L(0-，瘀止痛、清心除烦等功效，近来也被用于糖尿病的辅[CJ）制备。收稿日期：$%%&1%21!%，修回日期：$%%&1%31$2。"通讯作者。4-)：5#1!%15$#$3%#!；678：5#1!%1#$995!32；:1.7;)：07;.?@;<7*A(.N期顾铭等：高速逆流色谱法分离纯化丹参并尝试制订中药指纹图谱G;3!"#"#高效液相色谱试剂采用一级色谱纯（!"#$%&助于提高固定相保留，使系统的分辨率得到保证，同’("%)*"+"(,-./0.，12）。将反渗透处理过的水时兼顾运行时间，确定M’

8、,,,转速为L99&?=")，流动（345!，5"66"7-&%，1’8）通过9:;<滤膜减压过滤相流速为A=/?=")，固定相保留率达到G4:4E；从进"=后使用。标准对照品用高速逆流色谱的流动相配制样阀进样N=/，399=>；洗脱过程中紫外检测仪在成3=>?=/，经9:;<"=滤膜过滤使用。A49)=连续监测；根据记录仪显示的