夏天无生物碱的高速逆流色谱分离纯化

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1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第6期2010年6月ChineseJournalofAnalyticalChemistry783～788DOI:10.3724/SP.J.1096.2010.00783夏天无生物碱的高速逆流色谱分离纯化3王岱杰刘建华耿岩玲王晓段文娟傅茂润(山东省科学院山东省分析测试中心,济南250014)摘要采用pH2区带精制逆流色谱与常规高速逆流色谱相结合的方法快速分离纯化夏天无总生物碱。利用pH2区带精制逆流色谱对夏天无总生物碱进行分离,以正己烷2乙酸乙酯2甲醇2水(5∶5∶2∶8,V/V,上相加5mmol/L三乙胺,下相加

2、5mmol/LHCl)为溶剂系统,上样量3.0g,分离得到1个混合物和3个高纯度的生物碱单体:原阿片碱(375mg)、苏元胡碱甲(362mg)和比枯枯灵(246mg),其纯度分别为97.5%,95.6%和9711%。所得混合物850mg经常规高速逆流色谱二次分离,以正己烷2乙酸乙酯2甲醇2水(1∶0.8∶1.1∶1,V/V)为溶剂系统,得到比枯枯灵(105mg)和四氢巴马亭(470mg)单体,纯度分别为99.1%和99.7%。从该药材分得苏元胡碱甲,两种制备分离模式相结合,提高了夏天无生物碱的分离效率。关键词夏天无;pH2区带精制逆流色谱;高速逆流色谱;生物碱1

3、引言夏天无为罂粟科植物伏生紫堇(Corydalisdecumbens(Thunb.)Pers.)的干燥块茎,具有活血通络,[1]行气止痛的功效,主要用于治疗中风偏瘫、跌扑损伤、风湿性关节炎、坐骨神经痛等。夏天无的主要[2,3]活性成分为生物碱类化合物,如原阿片碱、比枯枯灵和四氢巴马亭等。建立主要活性成分的分离制备方法,对夏天无药材及其产品的质量控制十分必要。传统的柱层析方法存在耗时长、容易造成样品的不可逆吸附、变性及样品回收率低等缺点。高速逆流色谱(HSCCC)是一种不用固态载体的液2液分配色谱,它根据样品在两相溶剂中分配系数的不同实现样品的分离,可有效避免因不

4、可逆吸附引起的样品[4～8]损失、失活、变性等,已广泛应用于天然产物的分离和提纯。pH2区带精制逆流色谱(pH2ZRCCC)是在HSCCC基础上发展起来的特殊分离制备技术,依据化合物的解离常数(Ka)和疏水性的不同而实[9]现分离,适合于有机酸、有机碱制备性分离,具有制备量大和分离馏分高度浓缩纯化的特点。本研究采用pH2区带精制逆流色谱结合常规高速逆流色谱对夏天无总生物碱进行分离纯化,快速分离制备出4个高纯度的生物碱单体:原阿片碱、苏元胡碱甲、比枯枯灵和四氢巴马亭(结构见图1)。图1夏天无中分离出的化合物结构式Fig.1Chemicalstructureofco

5、mpoundsseparatedfromCorydalisdecumbens(Thunb.)Pers.2实验部分2.1仪器、试剂与材料GS10A高速逆流色谱仪(北京新技术研究所);S系列柱塞式泵(北京圣益通技术开发有限公司);2009210230收稿;2010201226接受本文系国家自然科学基金(No.20872083)和山东省科技攻关(No.2008GG2NS2024,BS2009SW047)资助3E2mail:wangx@keylab.net©1994-2010ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Al

6、lrightsreserved.http://www.cnki.net784分析化学第38卷8823B型紫外检测仪(北京宾达英创科技有限公司);Waters600高速液相色谱仪(美国Waters公司);VarianINOVA2600核磁共振波谱仪(美国Varian公司);1100Series6320ion2trap电喷雾离子阱质谱仪(美国Agilent公司)。质谱分析条件:正离子模式,样品通过流动注射泵进样,流速0.2mL/min,干燥气温度350℃;干燥器流量9.0L/min;雾化气压强241.33kPa;毛细管电压4kV。质量范围m/z50～1200,实验前

7、质量数经过校正。夏天无药材购于山东中医药大学中鲁医院,经山东省中医药大学李佳博士鉴定为罂粟科植物伏生紫堇(Corydalisdecumbens(Thunb.)Pers.)的正品药材;粗提取的制备及分离用溶剂均为分析纯(中国医药集团上海化学试剂公司);HPLC分析用乙腈为色谱纯(美国天地公司);实验用水为过滤蒸馏水。2.2样品制备取夏天无药材3.0kg粉碎过20目筛(0.9mm孔径),加85%乙醇10L,回流提取3次,每次3h,过滤,合并滤液,减压回收乙醇得浸膏。用800mL1%HCl超声溶解,过滤,以适量石油醚萃取脱脂。脱脂水溶液加稀氨水不断搅拌调节至pH9.5

8、,沉淀,过滤,得夏天无总