色谱翻译100520

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1、抗原表位分子印迹膜测量重合炭疽保护性抗原的反应和细分腔Dar-FuTai,*,†Ming-HongJhang,†Guan-YuChen,†Sue-ChenWang,†Kuo-HaoLu,†Yu-DerLee,‡andHsin-TzuLiu‡东华大学化学系花莲、台湾清华大学化学工程学院，新竹、台湾一种分子印迹膜被制备在表位肽上，然后转移到石英晶体微天平上的（QCM）芯片上。这5个肽通称为线性肽或构象表位的炭疽保护抗原PA83。印迹的结果是抗原与相应的模板亲和，随着基本单体的使用，结合效应进一步提高了向nanomolar水平增强的亲和力。具

2、有亲和力的肽诱导其相应的分子聚合物（MIP）比诱导分析残留物分子更密切。所有的表位腔不同的保护性抗原表位的PA83区域以及相应的蛋白转换酶Furin均裂解为片段PA63和PA20，该芯片的QCM反应不同，在picomolar的范围内观察保护性抗原片段，从而证明了操作有明确方向的表面蛋白一种方法炭疽病，是一种急性传染病，是由炭疽芽孢孢子形成的，在机场，海关，战场等地方对这种危险的病菌做检疫和检查是个冒险的问题。当细胞感染了炭疽热，它们就会分泌三种蛋白质：保护性抗原(PA83,83kDa)，致命因子(LF,90kDa)，以及水肿因子(LF,

3、90kDa)。保护性抗原（PA83），在大多数哺乳动物细胞内受体，（PA83）由弗林蛋白酶裂解为PA20和PA63，PA63是转换为heptameric环状齐聚物，形成较大的孔隙，允许LF和EF进入到细胞里面，PA83在炭疽病的致病原因中扮演了很重要的作用，PA83,PA63,和PA20都认为是炭疽生物的标志物。人类炭疽疫苗的活性成分，即保护性抗原，其晶体结构已被确定。此外，反PA83具有抗体的能力，可防止炭疽动物感染，控制PA83关键是要早诊断，缩短操作时间。一种新型保护性抗原识别检测系统具有极大的市场价值。一些抗体，被应用于保护性抗

4、原的检测。分子印迹聚合物（MIP）已经成功地在模拟自然受体中表达。今天，已经有越来越多的直接蛋白质印迹被报告。然而，因成本问题致使这种方法的应用极其有限。蛋白质普遍是昂贵的，因此，一种廉价的可任意处理碎片的发展几乎是不可能的。在此之前，抗原表面方法已经证实：发展这些线性表位腔的多种优势，即：（1）蛋白抗原表位丰富，可以通过晶体结构和抗原表位显示映射，（2）抗原表位印迹结果表明，空腔有作为他们母体蛋白结合位点的功能，（3）抗原表位腔有足够的弹性蛋白和维护随后附件的天然构象蛋白质，（4）抗原表位腔能够操纵有明确方向的表面蛋白，在制作上比使用

5、组氨酸标记，生物素标记，特异性抗体络合等更容易、更便宜22。在这方面，我们设计并合成了聚合物膜形成的几个表位腔，以进一步探讨epitope-cavities的大小和位置对表位腔的影响，他们能够正确地检测和证明炭疽存在于PA83，PA63，PA20。实验部分（中银-L-半胱氨酸）丙烯酸，丙烯酰胺，酪胺，及中银-L-组氨酸均来自Sigma-Aldrich公司（圣路易斯，密苏里州）。N-Benzylacrylamide购于兰开斯特（兰开夏郡，英国），来自保护性抗原（PA炭疽）的合成肽（SPPS的探索）用微波合成。使用承担N-ACR-酪胺的载体

6、酪Acrylation和（N-ACR-L-半胱氨酸-NHBn）2为原料来合成（中银-L-半胱氨酸）227，缓冲液为所有实验用的磷酸盐缓冲液（PBS）（20mM的磷酸二氢钠，pH值7.0），QCM是从太田电子有限公司（台湾，台北）购买的。重复性为±1Hz，QCM包括8毫米直径，10兆赫的AT切金电极（石英水晶制造磁盘，直径4.2毫米）。晶体保护性抗原（PA83）及其片段（PA63和PA20）使用的是纯化的rPA，由名单生物实验室（坎贝尔，加利福尼亚州）制备，其在评估过程中被作为商业冻干制剂。由中银-L型与甲醇酯化合成的ACR-L-组氨酸-

7、NHBn，作为一种催化剂来形成木瓜蛋白酶叔丁氧羰-L-组氨酸甲酯。叔丁氧羰-L-组氨酸甲酯转化中银-L-组氨酸与木瓜蛋白酶存在于苄NHBn，脱去保护与三氟乙酸形成中银集团，其次与acrylation合成ACR-L-组氨酸-NHBn制备印迹聚合物涂层的QCM在QCM上的磁性粒子被浸泡在10mM，为期16小时的高效液相色谱级乙腈（n-的ACR-L-半胱氨酸-NHBn）2中，然后用乙腈冲洗彻底，无论丙烯酸或的ACR-L-组氨酸-NHBn（55μmol），丙烯酰胺（55μmol）的N-benzylacrylamide，或N-的ACR-酪胺（11

8、0μmol），氮，N'-二乙烯双丙烯酰胺（22μmol）和3肽μmol在0.3毫升溶液（乙腈混合/20mM，水）1:1）,重复3次，沉积在上面的等分微升第（n-的ACR3-L-半胱氨酸-NHBn）金电极芯片