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《高速逆流色谱分离纯化木蝴蝶中黄芩素和白杨黄素》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第34卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报特刊2006年9月ChineseJournalofAnalyticalChemistryS243～S246高速逆流色谱分离纯化木蝴蝶中黄芩素和白杨黄素3孙爱玲孙清华柳仁民(聊城大学化学化工学院,聊城252059)摘要建立了高速逆流色谱分离纯化木蝴蝶黄芩素和白杨黄素的方法。两相溶剂系统为石油醚2乙酸乙酯2甲醇2水,固定相为5∶5∶5∶5(V/V)体系的上相,以5∶5∶5∶5(V/V)和5∶5∶7∶3(V/V)体系的下相为流动相进行梯度洗脱。从300mg木蝴蝶粗提物中一步分离纯化得到2515m
2、g黄芩素和3616mg白杨黄素。经高效液相113色谱分析,纯度分别为9912%和100%。其化学结构由H2NMR和C2NMR鉴定。关键词高速逆流色谱,木蝴蝶,黄芩素,白杨黄素1引言木蝴蝶为紫葳科植物木蝴蝶(Oroxylumindicum(L.)Vent.)的干燥成熟种子,是我国常用中草药[1]之一,并被收入中国药典,具有止痛、止咳及清热等作用,用于治疗感冒、支气管炎和其它一些疾病。黄芩素和白杨黄素为木蝴蝶主要有效成分,具有清热、抗过敏,抗氧化和抗癌等功能。近几年来对木蝴蝶中黄酮类成[2～4]分的研究非常活跃。因此,建立相关成分的高效分离纯
3、化方法具有重要意义。高速逆流色谱(HSCCC)是一种不使用固态支撑体或载体的液液分配色谱技术。它克服了固相载体对样品的吸图1黄芩素(R=OH)和白杨黄素(R=H)的附损失、变性等缺点,并可以在短时间内实现高效制备性分化学结构式[5]离,因而在中药有效成分的分离与纯化方面得到了广泛Fig.1Chemicalstructureofbaicalein(R=OH)[6～11]的应用。本实验应用HSCCC从木蝴蝶药材中成功地andchrysin(R=H)分离纯化出黄芩素和白杨黄素(结构见图1),经高效液相色谱(HPLC)分析,其纯度分别为9912%
4、和100%。2实验部分2.1仪器、试剂与材料TBE2300A高速逆流色谱仪(上海同田生化技术有限公司);'KTAprime泵及检测系统(瑞士安玛西亚生物有限公司);HX21050恒温器(北京博医康实验仪器有限公司);1100高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);色谱柱:SpherigelODSC18(250mm×416mm,5μm);Mercuryplus400核磁共振仪(美国瓦里安公司)。粗提物的制备及HSCCC分离用溶剂(石油醚、乙酸乙酯、甲醇等)均为分析纯(天津化学试剂三厂)。HPLC分析用甲醇为色谱纯(禹城化工厂),实验用水为二次蒸馏
5、水。木蝴蝶药材购于聊城市利民大药店,经山东中医药大学张永清教授鉴定为正品药材。2.2样品制备取100g于60℃恒重的木蝴蝶药材粉碎,用700mL70%甲醇回流提取3次(每次2h),合并提取液,减压蒸馏,得浸膏3413g。浸膏加水溶解后用其3倍体积的正丁醇萃取3次,合并正丁醇部分,减压蒸馏回收溶剂,得浸膏1616g。此浸膏再用石油醚2乙酸乙酯2甲醇2水(5∶5∶5∶5,V/V)体系的下相100mL溶解后,取等体积的上相萃取4次,合并上相部分,减压蒸馏得淡黄绿色粉末(即木蝴蝶药材的粗提物)518g,放置冰箱内备用。2005209206收稿;2
6、006201228接受244分析化学第34卷2.3分配系数的测定本实验用HPLC测定样品在不同溶剂体系的分配系数。取适量木蝴蝶药材的粗提物于5mL试管中,用预先达到分配平衡的两相溶剂系统的下相将其溶解,用HPLC进行检测,峰面积为A1。然后取等体积的上相加入此溶液,剧烈振荡使其充分混合,待达到分离平衡后,再取下相用HPLC检测,峰面积为A2。分配系数K则按下式计算:K=(A1-A2)/A2。2.4两相溶剂系统及样品溶液的制备本实验所用溶剂系统为石油醚2乙酸乙酯2甲醇2水(5∶5∶5∶5和5∶5∶8∶2,V/V),按其比例分别将各种溶剂加入
7、分液漏斗中,剧烈振荡使溶液充分混合,分相平衡后,分出上相和下相,使用前分别用超声波脱气30min。取大约300mg木蝴蝶药材粗提物,溶于4mL石油醚2乙酸乙酯2甲醇2水(5∶5∶5∶5,V/V)上相中,振荡使之完全溶解,以备HSCCC进样。2.5HSCCC分离过程用'KTAprime系统将石油醚2乙酸乙酯2甲醇2水(5∶5∶5∶5,V/V)的上相(固定相)和下相(流动相)以40∶60的体积比同时泵入HSCCC螺旋管。当螺旋管完全充满后,仅以210mL/min的流速泵入流动相,同时将螺旋管转速调为850r/min。达到动力学平衡后(大约30
8、min),将样品通过进样阀注入分离螺旋管。进样80min后,进行梯度洗脱。流动相在50min内由100%的5∶5∶5∶5体系的下相变为100%的5∶5∶7∶3体系的下相。分离温度控制在25℃,
