欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:38210560
大小:319.37 KB
页数:4页
时间:2019-06-03
《TA载体pEASY_T1Simple在基因克隆中的新应用_杨文丽》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第18卷第2期天津农学院学报Vol.18,No.22011年6月JournalofTianjinAgriculturalUniversityJune,2011文章编号:1008-5394(2011)02-0013-03TA载体pEASY-T1Simple在基因克隆中的新应用通信作者杨文丽,丁博,王俊斌,李明,吕芳芳,谢晓东(天津农学院农学系,天津-布里斯托环境变化对农作物影响研究中心,天津300384)摘要:在基因克隆操作中,由于常用克隆载体多克隆位点的酶切位点数目有限,造成一些DNA片段的克隆、连接受限。为解决这一问题,本文利用pEASY-T1Simple载体无酶切位点的特点,通
2、过TA克隆的方法引入多个单一酶切位点,并对所构建的克隆载体进行了验证。最后证明,这种方法可高效构建含有不同多克隆位点的载体,克服了对常用克隆载体的依赖,大大提高了基因操作的灵活性和有效性。关键词:TA克隆;pEASY-T1Simple;多克隆位点中图分类号:Q782文献标识码:ANewApplicationofTAVectorpEASY-T1SimpleinGeneCloningCorrespondingAuthorYANGWen-li,DINGBo,WANGJun-bin,LIMing,LFang-fang,XIEXiao-dong(Tianjin-BristolResearc
3、hCenterfortheEffectsoftheEnvironmentChangeonCrops,DepartmentofAgronomy,TianjinAgriculturalUniversity,Tianjin300384,China)Abstract:AmajorchallengeinthecloningofmultipleDNAfragmentsistofindsuitablerestrictionenzymesitesinthecommonlyusedcloningvectors.Toaddressthisproblem,inthisstudy,itisconstruc
4、tedanewTAcloningvectorsbyaddingdesirablemultiplecloningsites(MCS)tothepEASY-T1Simple,whichdonotcontainanyrestrictionenzymesitesinoriginalforms.Subsequently,itisverifiedthenewcloningvectorsbydigestingthedesignedMCS.TheresultsshowthatthedesignedMCSweresuccessfullyengi-neeredintothepEASY-T1Simple
5、vector.Insummary,anefficientmethodhasbeendevelopedtoconstructthepersonalizedTAcloningvectorswithdesirableMCSs,andthustoimprovetheflexibilityandefficiencyofgeneengineering.Keywords:TAcloning;pEASY-T1simple;multiplecloningsites在基因克隆操作中,常常依据研究目的的不广泛。同,将多个DNA片段连接到克隆载体的多克隆TA克隆法是在DNA片段的3'端加上A,与位点,从而
6、合成一个新的重组DNA。常用的克隆经过特殊处理的具有3'-T突出末端的DNA片段载体有pBluescript、pBR322和pUC等,这些载通过T/A配对进行连接。采用这种方法克隆时,体含有不同的多克隆位点,适于将含有不同酶切无需引入限制性酶切位点,不需要对DNA片段[1]位点的DNA片段连接起来。但研究中发现,进行修饰,如酶切、平末端化或去磷酸化处理[2]有些DNA片段在常用的克隆载体上找不到合适等,具有操作简单、快速、重组效率高等优[3]的限制性酶切位点,因此不能把这些DNA片段点。目前所使用的TA克隆载体主要有pLUG-连接到载体上进行基因工程操作。为解决DNAT、pGEM-
7、T、pED-T、pEC-T、pSC-T、[4]克隆受酶切位点所限的问题,一些不依赖于限制pEASY-T1Simple、pEASY-T等。但TA克性内切酶的克隆方法被开发出来,例如TA克隆隆法只能对单一DNA片段进行克隆,不能进行和TOPO克隆等方法,其中TA克隆应用得较为多个DNA片段的克隆和连接。收稿日期:2011-02-25基金项目:国家转基因生物新品种培育重大专项“小麦抗旱耐高温相关转录因子和miRNA基因的克隆及重要候选基因的功能鉴定”(2009ZX08009
此文档下载收益归作者所有