流式细胞计在海洋浮游植物研究中的应用

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1、研究综述∞∂∞•≥流式细胞计在海洋浮游植物研究中的应用mΑΠΠΛΙΧΑΤΙΟΝΟΦΦΛΟΩΧΨΤΟΜΕΤΡΨ(ΦΧΜ)ΤΟΣΤΥ∆ΨΟΦΜΑΡΙΝΕΠΗΨΤΟΠΛΑΝΚΤΟΝ晁敏张利华张经k华东师范大学河口海岸国家重点实验室上海usssyul中图分类号±vvz文献标识码文章编号tsss2vs

2、ykussvlsw2sst{2sx传统的显微镜技术是浮游植物鉴定的重要手段ot流式细胞计检测分析海洋浮游植物至今仍是浮游生物学家们进行研究观测的必备工具o的方法但当研究较小的微型藻类k±¤±²³«¼·²³¯¤±®·²±ousΛ°l及微微型藻类k³¬¦²³«¼·²³¯¤±®

3、·²±ouΛ°l时o常tqt研究方法规显微镜则存在困难o如水体中光合性的细菌必需染许多应用于细胞生物学或生物化学的流式细胞色才能通过荧光显微镜观测o而且o当研究涉及时间!术方法并不能被很好地套用于浮游植物的分析∀空间尺度时o牵涉到的工作量非常大o显微镜方法在¤µ¬¨等总结了一般用于浮游植物!细菌!病毒分析的物种计数的速度与准确性方面受到很大限制∀流式细胞计方法≈{ ∀近年的文献检索表明o应用流式细胞计kƒ¯²º≤¼2tqtqt浮游植物样品的采集及处理·²°¨·µ¼oƒ≤l检测微型及微微型的浮游植物正为越ktl取样由于流式细胞计分析所需样品量一次来越多的研究者所

4、采用∀流式细胞计以其快速!样品仅需几毫升o因而可采用一般棕色塑料试剂瓶kxs制备简单!数据可存储备份的特点o在常规显微技术°l采样~为了获得较好的分析结果o取样应采取合所难以检测的细菌!微型及微微型浮游植物类群的理的时间r空间尺度o如可根据≤×剖面确定采样层分析检测方面逐渐占有了一席之地∀流式细胞计最初次o根据研究区域的物理!化学或生物因子的不同确设计用于分选哺乳动物细胞及研究动物细胞生物化定采样站位等∀学特性o至今仍大量应用于以生物化学!细胞生物kul过滤与浓缩流式细胞计在分析大粒径微粒学!生物医学为代表方向的研究领域o分析的细胞类方面还有局限o这主要是受仪

5、器自身激光光斑大小!型多为动物细胞o也有极少数的高等植物细胞o而流进样口口径较小等因素限制o如ƒ≥≤≥¦¤±型流式细胞式细胞计最早应用于分析浮游植物是在{s年代o计的氩离子激光器光斑仅为usΛ°≅ysΛ°o较大的≈tou ≈vow 有关海洋中个体细胞及微浮游植物通过时激光所通过的可能仅为藻体的一部°¤¤∏等!≠¨±·¶¦«等粒分析方法的叙述o对于流式细胞计应用于海洋微型分o但仪器可能把此认定为通过整个细胞o必然会产浮游植物研究上起了积极的推动作用≈x o≠¨±·¶¦«!¯2生错误o再者大型藻类有可能堵塞样品进样管o因而¶²±等还专门对于分析方法作了综述o更进一

6、步地促通常需要用滤膜过滤样品o以去除大型浮游动!植物进了流式细胞计在微型及微微型浮游植物生物学研的影响o滤膜的种类由研究的目的而作出选择o而孔究中的运用∀可以说正是流式细胞计的使用o发现并径一般在xsΛ°以下~当单位体积样品中细胞数量过分离出一种微微型浮游植物原绿球藻k≤¼¤±²¥¤¦·¨µ¬∏°≈y Προχηλοροχοχχυσµαρινυσlo为迄今为止发现的个体最小的一种可进行光合作用的细菌o而研究结果表明原m国家重点基础研究专项经费资助t

7、

8、

9、swvz号∀绿球藻与另外一种光合细菌聚球藻k≤¼¤±²¥¤¦·¨µ¬∏°第一作者}晁敏o出生于t

10、zx年o博

11、士o研究方向为海洋生Σψνεχηοχοχχυσl广泛分布于世界各大海域o并在初级生物地球化学∀电话}sut2yuuvu{{z∀≈z 收稿日期产力构成中占有重要地位∀}usst2sv2us~修回日期}usst2tu2tst{海洋科学russv年r第uz卷r第w期研究综述∞∂∞•≥少时通常采取浓缩的方法o但并不是必需步骤∀uqt应用浮游植物的自发荧光检测微型及≈{ 提出利用甲醛kvl保存¤µ¬¨kthl或戊二醛微微型浮游植物ksqthlk在样品中的最终浓度l固定过滤样品o在室微型及微微型浮游植物细胞一般为单细胞个体o温下固定x∗tx°¬±o然后放在液氮罐中保存o采

12、用此大小小于usΛ°o个体大小不会超过激光光斑大小o方法可避免浮游植物细胞数量的过多损失!损坏o固也不会堵塞进样口o因而符合流式细胞计样品需为单定后样品可带回实验室内分析o这种方法据作者报道细胞悬液的要求o且微型及微微型浮游植物细胞内含可使样品性质在t年左右不会发生较大改变∀有光合作用色素叶绿素k¦«¯²µ²³«¼¯¯lo叶绿素被激发tqtqu流式细胞计样品测量产生红色荧光o可与水体中其他杂质或泥沙颗粒相区ktl材料过xsΛ°滤膜的浮游植物样品o如样别o还有些浮游植物如红藻k¨§¤¯ª¨l!隐藻品已固定且保存于液氮罐中o则可在水浴条件kvzk≤µ¤³·²³«¼

13、·¤l!聚球藻属k≤¼¤±²¥¤¦·¨