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1、细菌DNA的提取方法针对一些不易于提取的细菌的方法:试验试剂：抽提缓冲液：2%CTAB(W/V)2%PVPK25(w/v)（去色素）100mMTris-HCl(pH8.0)25mMEDTA(pH8.0)2.0MNaCl10MLiCl2MLiClDEPC-water（抑制RNA酶活性）3MNaAc(pH5.2)96%乙醇70%乙醇试验步骤：1、抽提缓冲液65℃预热。2、加菌体到已经预热的缓冲液（700ul）中混匀，65℃，10min。3、加酚/氯仿/异戊醇（25：24：1），振荡，以12,000rpm，离心10min。4、取
2、上清，加氯仿/异戊醇（24：1）振荡，以12,000rpm，离心10min。5、重复再作一次步骤4。6、加入1/10体积的3M醋酸钠和1.5倍体积的乙醇（或加入等体积的异丙醇），－20C下沉淀。7、以2,000rpm，离心10min。8、弃上清，以70％乙醇条洗沉淀，也可以再用100％乙醇洗，然后溶解于100ml水中。 较为常用的细菌DNA提取方法：实验步骤：1、将菌株接种于液体LB培养基，37℃震荡培养过夜。2、取1.5ml培养物12000rpm离心2min。3、沉淀中加入567ul的TE缓冲液，反复吹打使之重新悬浮，加
3、入30ul10%SDS和15ul的蛋白酶K，混匀，于37℃温育1h.4、加入100ul5mol/LNaCl,充分混匀，再加入80ulCTAB/NaCl溶液，混匀后再65℃温育10min。5、加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混匀，离心4-5min,将上清转入一只新管中，加入0.6-0.8倍体积的异丙醇，轻轻混合直到DNA沉淀下来，沉淀可稍加离心。6、沉淀用1ml的70%乙醇洗涤后，离心弃乙醇． 真菌DNA提取总结的两种方法：第一种方法：试验步骤：1、取真菌菌丝0.5g,在液氮中迅速研磨成粉。2、加入4mL提取液，快速振荡混匀。3
4、、加入等体积的4mL的氯仿:异戊醇(24:1)，涡旋3～5min（此处是粗提没有加酚）。4、以4℃，1000rpm，离心5min。5、上清再用等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提一次。以4℃，10,000rpm，离心5min。6、取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷的异丙醇或2.5倍体积的无水乙醇沉淀,混匀,静置约30min。7、用毛细玻棒挑出絮状沉淀,用75%乙醇反复漂洗数次,再用无水乙醇漂洗1次,吹干，重悬于500ulTE中。8、加入1ulRNaseA（10mg/mL），37℃下处理1h。9、用酚（pH8.0）:氯仿
5、:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次。以4℃，10,000rpm，离心5min。10、取上清，加入1/10倍体积的3MNaAc,2.5倍体积的无水乙醇,-70℃沉淀30min以上。11、沉淀用75%乙醇漂洗，风干,溶于200ulTE中，-20℃保存备用。DNA提取液：0.2MTris-HCl（pH7.5），0.5MNaCl，0.01MEDTA，1％SDS，3MNaAc。第二种方法：试验步骤：1、真菌菌丝0.5-1g,在液氮中迅速研磨成粉。2、加入3mL65℃预热的DNA提取缓冲液，快速振荡混匀65
6、℃水浴30min,期间混匀2-3次。3、加入1mL5MKAc，冰浴20min。4、等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提1次（10,000rpm，4℃离心5min）。5、取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇,混匀,静置约30min。6、用毛细玻棒挑出絮状沉淀,用75%乙醇反复漂洗数次,再用无水乙醇漂洗1次,吹干，重悬于500ulTE中。7、加入1ulRNaseA（10mg/mL），37℃处理1h。8、用酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次。以4℃，10,000rpm，离
7、心5min。9、取上清，1/10V3MNaAc,2.5V体积的无水乙醇,-70℃沉淀30min以上。10、沉淀用75%乙醇漂洗，风干,溶于200ulTE中，-20℃保存备用。 细菌基因组DNA的提取方法综述，提供了5种方法。 1快速微量提取法A.取1.5ml菌体培养物于一灭菌Ep管中，12000rpm离心1min,丢去上清夜，收集菌体。B.加入400ul裂解液（40mMTris-醋酸，20mM醋酸钠,1mMEDTA,1%SDS,pH7.8）混匀,置于37oC水浴1hr。C.然后加入200ul5mol/L的氯化钠溶液，混匀
8、后于13000rpm离心15min。D.取上清液，用苯酚抽提2次，氯仿抽提1次。E.加两倍体积无水乙醇，1/10体积醋酸钾(3M,pH8.0)，-20度保存1小时后，13000rpm离心15min，弃上清液，沉淀用70%乙醇洗2次；置于室温干燥后，溶于50ulTE溶液中，置4℃保存备用。2蛋白酶/SDS
