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1、核农学报 2003,17(5):350～353350ActaAgriculturaeNucleataeSinica文章编号:100028551(2003)052350204离子束介导甘蓝全DNA转化拟南芥菜的RAPD分析1,22122卞 坡 秦广雍 余增亮 霍裕平 王 燕(11中国科学院等离子物理所,安徽合肥 230031;21郑州大学离子束生物工程实验室,河南郑州 450052)摘 要:在离子束介导甘蓝外源全DNA转化拟南芥菜的当代发现了2株表型变异株,以其中的1株(编号为T6)作为研究对象,用40对10碱基的随机引物对该株和其后代株进行RAPD分析,
2、发现S168号引物对T6和其后代株的RAPD结果与对照相比有明显差异,说明离子束介导外源基因转化可以引起受体基因组变异,并且该变异有遗传性。对差异条带测序后同拟南芥菜基因组序列比对,发现该条带的序列在ABCTransporter结构基因的内部。关键词:离子束;RAPD;拟南芥菜;全DNA转化RAPDANALYSISOFArabidopsisthalianaTRANSFERREDWITHTOTALDNAOFCABBAGEBYIONBEAM1,22122BIANPoQINGuang2yongYUZeng2liangHUOYu2pingWANGYan(1.In
3、stituteofPlasmaPhysicsofChineseAcademyofSciences,Hefei,Anhui,230031;2.IonBeamBio2EngineeringLabofZhengzhouUniversity,Zhengzhou,Henan,450052)Abstract:TwomutantswerefoundamongtheArabidopsisthalianatransferredwithtotalDNAofcabbage.VariationofgenomeofT6anditsoffspringwereanalyzedbyRA
4、PD2PCRwith40randomprimers.TheresultfromS168primerwasdifferentfromtheCK,indicatingthatvariationofgenomecanbemadebytotalDNAtransferringbyuseofionbeam,andthisvariationishereditary.ItisfoundthatS16821850isincludedwithinthegeneofABCtransporterbyaligningwithgenomeofArabidopsisthalianai
5、nTAIT.Keywords:ionbeam;RAPD;Arabidopsisthaliania;transferring;genome低能离子束介导植物转基因是近几年发展起来的一种遗传转化技术。低能离子作为一种集质、荷、[1]能于一体的离子首先应用于材料表面改性的研究。余增亮发现低能离子与生物组织相互作用时,动量和能量的沉积引起的物理和化学溅射作用能对生物组织进行层层刻蚀,因为生物组织本身的结构具有极度的不均一性,刻蚀的结果是在生物组织内部形成可供大分子通过的“通道”。另外,低能离子作为带电离子,在与生物样品的作用过程中,富集在细胞表面的正电荷能改变细
6、胞膜的通透性,这些低能离子与生物组织作用的独有特性使这项技术很快应用到植物转基因工作中来,并在水稻、棉花、小麦和烟[2,3]草上得到成功的应用。但对离子束介导外源全DNA转化技术却颇有争议,外源DNA片断能否进入受体,其整合规律和对受体基因组的影响以及转化受体的遗传性和遗传规律等都是需要研究和解决的。本文以拟南芥菜为转化受体,以拟南芥菜的同科植物甘蓝为转化供体,用RAPD作为分析手段,研究离子束介导外源DNA转化中的基本规律。收稿日期:2002205216基金项目:国家科技攻关项目资助课题(2001BA302B-03)作者简介:卞坡(1973～),男,河
7、南人,在读博士,从事离子束介导转基因的机理研究。5期离子束介导甘蓝全DNA转化拟南芥菜的RAPD分析3511 材料与方法111 材料拟南芥菜为Columbia生态型,来自英国Nottingham大学拟南芥菜储存中心,编号N1092。甘蓝为红甘蓝。宿主菌DH5α,T2载体pUCm2T。离子注入机为俄罗斯产TITAN源低能离子注入机,PCR扩增仪型号为GeneAmpPCRSystem2400,DNA测序仪器为ABIPRISM377296,测序试剂为BigDyeterminatorv210。基因组DNA小量制备试剂盒(No.SK252),UNIQ210柱式DN
8、A胶回收试剂盒(No.SK131,NaIversion),T2载体PCR产物克隆
