DEPC水的配制

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1、1.首先需要明确，DEPC（焦碳酸二乙酯）是一种油状液体，跟水难容。故配置时室温通风橱中完成，常常需要放置过夜。DEPC在高压下会分解为CO2和乙醇，所以，如果你的DEPC水是用来处理实验器具的，就不能高压；如果你的DEPC水是用来配制试剂的，那么你就可以高压。不过不管你配制DEPC水的目的是什么，在配制DEPC水时的双蒸水都不需要高压灭菌，因为即便是你用来处理器具，在泡过DEPC水之后还必须要经过高压灭菌滴。泡实验器具的DEPC水的配制（0.1%）：1000ml双蒸水中加1mlDEPC，放在1

2、000ml容量瓶中静置4小时后或过夜备用。保存方法：封闭冷藏备用。最好分装小瓶来用，尽量避免污染。毕竟搞一次也不容易。配试剂的DEPC水的配制（0.1%）：100ml盐水瓶内装40ml双蒸水，加40ulDEPC，37℃过夜，高压处理121c，25minDEPC分解成二氧化碳和酒精，封闭冷藏备用。最好分装小瓶来用，尽量避免污染。搞一次也不容易。2.焦碳酸二乙酯（DEPC）DEPC即diethylpyrocarbonate。分子式为C6H10O5，分子量为162.14，无色、澄清透明的液体。是一种强

3、烈但不彻底的RNA酶抑制剂。它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。DEPC可以抑制植物细胞上的NSCC，是常用的NSCC抑制剂.DEPC毒性1．DEPC(diethypyrocarbonate，焦碳酸二乙酯)是一种高效烷化剂。DEPC不稳定，在水溶液中会分解成乙醇和二氧化碳，155℃时也会分解。DEPC遇到氨水会发生反应产生氨基甲酸乙酯。2．DEPC有刺激性，对眼睛和气道粘膜有强刺激，在操作中应尽量在通风的条件下进行，DEPC毒性并不是很强，但吸入的毒性是最

4、强的，使用时戴口罩，不小心沾到手上注意立即冲洗。3．DEPC是一种潜在的致癌物质，主要是能生成乙酯基衍生物和乙酯类衍生物，其中尿烷是一种已知的致癌物质。DEPC在水中的半衰期：25℃、磷酸缓冲液中其半衰期为4min（pH6）、9min（pH7）。Tris缓冲液中DEPC的降解会加快，25℃时，半衰期为1.25min（pH7.5）、0.37min（pH8.2）。DEPC加入到水中之后并不会立即溶解，而是形成小的球状液滴（类似于油滴），需要彻底搅拌直至液滴消失才算混合均匀。此时的溶液才可以拿去高温除

5、菌除DEPC。一般灭菌15min即可将DEPC彻底除去。（试验所用试剂也可用DEPC处理，加入DEPC至0.1%浓度，然后剧烈振荡10分钟，再煮沸15分钟或高压灭菌以消除残存的DEPC，否则DEPC也能和腺嘌呤作用而破坏mRNA活性。）配置加0.1%DEPC到去离子水中，混匀过夜，然后高温高压121℃，20min，DEPC即降解成二氧化碳和水，无毒。用途DEPC是一种有效的核酸酶抑制剂，它能够与很多酶的-NH，-SH或-OH等基团发生反应，从而破坏酶的活性位点。一般，常用浓度为0.1%（1L水中

6、加入1mLDEPC）的DEPC来作为RNA酶的抑制剂。比如，进行RNA实验时，要用DEPC处理实验所用的水和各种溶液。我们通常所说的DEPC（处理）水是指用DEPC处理过并经高温高压消毒的MiliQ纯水。DEPC（处理）水可以用于RNA沉淀的溶解，含有RNA的各种反应体系如反转录、siRNA的退火等，以及其它各种要求无RNase、DNase和proteinase的反应体系。使用注意事项1、DEPC可能溶解掉某些塑料枪头，因此，量取DEPC时要用玻璃器具。2、DEPC处理后的溶液要去除残余的DEP

7、C，一般121℃灭菌15min即可，也可以将其煮沸15min以达到去除的效果。可能会残留些许气味，可以放心使用。3、因为DEPC在Tris、HEPES等缓冲液中极易分解，因此不能直接用DEPC来处理Tris、HEPES等缓冲液。这种情况下，要先用DEPC处理水，然后再用DEPC处理过的水来配制缓冲液。4、AlthoughH2OpreparedwithreverseosmosissystemslikeMilli-QisfreeofRNases,itcanbecontaminatedbymicrob

8、ialgrowthifthemachineandpipingarenotwellmaintained.Thisisespeciallyproblematicincentralisedwatersystemswithmetresofpiping.5、ThefruitysmellcomingfromageingDEPC-containingsolutionsstemsfromtheestersthataregeneratedwhenethanolproducedfromhydrolysisreact