接合物蛋白Crk_在卵巢癌恶性潜能中的作用

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1、第33卷第7期第三军医大学学报Vol．33，No．72011年4月15日JThiMilMedUnivApr．152011675文章编号:1000-5404(2011)07-0675-04论著接合物蛋白CrkⅠ在卵巢癌恶性潜能中的作用车亚玲，王瑾，令狐华(400016重庆，重庆医科大学附属第一医院妇产科)［摘要］目的证实接合物蛋白CrkⅠ在卵巢癌恶性潜能中的作用。方法采用Westernblot法检测卵巢癌组织、卵巢良性肿瘤组织、正常卵巢组织中Crk和Dock180蛋白的表达;用免疫沉淀法检测3种卵巢癌细胞株中Crk与Dock180蛋白的内源性结合;

2、用小干扰RNA敲低SKOV3细胞中内源性的Crk，检测Crk表达缺失性细胞Crk蛋白表达水平、Rac1酶活性和侵袭力的变化。结果Dock180与CrkⅠ的表达强度呈现明显的一致性，卵巢癌组织中二者的表达均显著高于卵巢良性肿瘤组织和正常卵巢组织(P＜0.05);而在卵巢良性肿瘤组织与正常卵巢组织之间未发现明显差异(P＞0.05)。3个卵巢癌细胞株中Dock180主要表现出与CrkⅠ的内源性结合。和对照相比，敲低Crk基因的细胞表现出侵袭能力和Rac1酶活性明显下降(P＜0．05)，而敲低CrkⅠ的细胞和同时敲低CrkⅠ和CrkⅡ的细胞相比无明显差异

3、(P＞0．05)。结论卵巢癌的恶性生物学行为与Crk/Dock180/Rac1信号通路相关，其中CrkⅠ在卵巢癌中扮演着主要角色。［关键词］信号接合物蛋白Crk;Dock180;人卵巢癌［中图法分类号］R737．31;R394．3;R730．23［文献标志码］AAdaptorproteinCrkⅠmediatesmalignantpotentialofhumanovariancancerCheYaling，WangJin，LinghuHua(DepartmentofObstetricsandGynecology，FirstAffiliatedHo

4、spitalofChongqingMedicalUniver-sity，Chongqing，400016，China)［Abstract］ObjectiveToexploretheroleofadaptorproteinCrkⅠinmalignantpotentialofhumanovariancancer．MethodsCrkandDock180expressionweredetectedbyWesternblottinginovariancancertissues(EOC，n=28)，benignovariantumors(BOT，n=13)

5、andnormalovarytissues(Normal，n=10)．Co-precipitationwasperformedtoevaluatetheinvivoprotein-proteininteractionofDock180andCrkin3differentovariancancercelllines(SKOV3，MCASandRMUG-Lcells)．TheexpressionofCrkinSKOV3cellsweresilencedbyusingsiRNAinterference，andthenRac1activityandcel

6、linvasioninthetransfectedcellswereobserved．ResultsTheintensityofCrkⅠandDock180expressionwasconsistentwitheachotherinEOCtissues．BothwereobservedtobesignificantlyhigherinEOCthanthoseintheBOTandnormalovarytissues(P＜0.05)．NosignificantdifferencewasfoundbetweenBOTandNormalgroupeit

7、herforCrkⅠorDock180expression(P＞0.05)．Inconsistentwiththisresult，Dock180preferredtocombinewithCrkⅠratherthanwithCrkⅡinall3ovariancancercelllines．Furthermore，CrkknockdowncellspresentedwithsustainableCrkⅠexpressiondepletion，significantlydecreasedRac1activityandcellinvasion．Conc

8、lusionCrkmightbeinvolvedinmalignantpotentialofhumanEOCmainlythroughC