同步荧光法测定色氨酸

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1、华,一北农学报一同步荧光法测定色氨酸武兴德任道生’北京甫农林科学院蔬菜中心北京摘要、、。用同步荧光法测定了玉米小麦花粉等样品中的色氨酸一般氨基酸分析用,。,氨基酸分析仪和液相色谱仪而色氨酸在酸解样品时被分解测不出要测定色氨酸,,。、需要重新制备样品改变体系比较繁杂在多种氨基酸中仅有色氨酸酪氨酸和苯丙氨酸有天然荧光,色氨酸的天然荧光最强提供了直接测定的有利条件。用,,,氢氧化钠碱解样品在肠℃时保温小时然后稀释调为一之,。,间定容最后用同步光谱扫描的办法测定即激发波长和发射波长的单色器之间,,。固定一定的波长差△入同时扫描得到一个同步荧光光谱其浓度和,。荧光强度有

2、良好的线性关系测定范围是一协本方法弥补了在氨,,。基酸测定中酸解样品时色氨酸被分解测不出的不足而且方法比较简单灵敏关键词同步荧光法色氨酸材料和方法、一仪器与试剂日立一荧,八型酸度计,。光分光光度计一烘箱,,准确称取生物制品色氨酸毫克用溶解倒入毫升容量瓶中然后。用稀释至刻度即件卜,,取的色氨酸标准液毫升移入毫升容量瓶中用稀释到。刻度即卜色氨酸备用、二操作,,称取一毫克样品到毫升试资中加入毫克可溶性淀粉再加入,。,,,毫升在火吹上封管把封好后的试管拿到烘箱中加热到℃左右保持小时取出。,,,冷却将碱提取液移入毫升容量瓶中加入蒸馏水到毫升用盐酸调为一,,。然后用蒸馏水

3、定容到毫升摇匀取出部分液体测荧光。本文于年月日收到。任道生现在北京市实验动物中心工作华北农学报卷,,、按上述操作方法取不同浓度的标准色氮酸测定荧光强度如图琦压且毛,八曰︺︸、,刨哪半称祠孚空白了、件、件、卜、件、俘、件、厂件、林、,么入色氛酸浓度拼图不同浓度色氮酸的光谱图色氨酸标准曲线图是由图的数据绘制的标准曲线。从图可以看出色氨酸的浓度与荧光强度有良好。的线性关系结果与讨论、一高温碱解过程快,,。℃碱解过程较慢可改用℃高温水解小时同样可以得到满忿的结果表色氨酸浓度与荧光强度关系色氨酸标准协相对荧光强度弓,,,从试验数据可看出色氨酸浓度和荧光强度相关极显著相关

4、方程为。℃高温水解只需小时,二。,相关系数肯省时问由于水解时温度高管内的压力增,,。大管易损坏因此封管要牢、二酸碱度对色氨酸测定的影响一,‘,,取同浓度相等体积的色氨酸加到弃墩瓶卜调节不同的工位观察荧光强度的变。化表值与荧光强度的关系值弓。相对带平强崖弓弓,值对色氨酸的荧光强度影响很大原因是色氨酸的量子效率依赖其功能团的电离程期武兴德等同步荧光法测定色氨酸,。,一,度即介质的与它的量子产率直接有关在值为时色氨酸呈一一,,此时’一‘量子’产率最高‘为一’’值在’一之间’色氨“酸呈喜。一一止量子’产率为一一一、“一一一“一一一“一“,,,。。在值小于时色氨酸呈玄入

5、一一此时量子产率很低只有因,,。此在水解液中调值在一之间荧光强度最大灵敏度最高、三不同取样的实验,。称取不同量磨细后的小麦碱解后测定表小麦取样最与芡光强度关系取样量相对荧光强度,了,,,荧光强度随取样量的增大而增大其线性方程是相关极显著,。即在一毫克范围内碱分解样品不扁要改变碱和可溶性淀粉的用量、四同步光谱特点,,半峰宽度变窄峰变尖提高了选择。性激发波长与发射波长之间固定波长差△入是毫微米,得到同步扫描荧光光谱半,峰宽毫米而单扫描的荧光光谱的半峰。,宽毫米这样用同步扫描测量方法半,。峰宽窄了近毫米提高了分辨率而同么入夭系很大,步扫描光谱图形状与选择的图荧光光谱

6、半峰宽比较,,选择合适可使峰锐化同时除去一些干扰、浓度拼的色氨酸,同步扫描半峰宽。同步扫描荧光光谱强度是。杂质的影响毫米、,··二。二艺协,二。。二浓度的色氨酸固定激发波长扫入入。描发射波长时的半峰宽毫米。二。二而△入入一入··,。,‘一一二。则入△入入,二式中为常数为被测物质浓度为发射波长一定时激发光谱对荧光强度的贡。,。丁。,献久为发射波长入为激发波长△入为固定波长差为激发波长一定时发射光。,。,二谱对荧光强度的贡献这样同步光洁强度不仅取决于也取决于和所选择的波长。,‘,,,差△入△入选择合适得到的石步扫描元谱半峰宽交窄在荧光分析中对提高选择性。消除其它杂

7、质干扰提供了一个途径,,、、,总之对色氨酸分析一般称取。屯克小支巨米花粉等粉碎样品按述操作进,。行均可测出色氨酸的含址华日北匕农衣筝学报狠一一一一一一一一一一一一一参考文献郭尧君《荧光实验技术及其在分子生物学中的应用》,北京,科学出,〕一版社一雷世寰用同步,,二〔〕荧光光谱测定不井花《分析化学》巧一,,平,,〔〕大久保邦彦高田通之助陆男同期励起荧光分析法之检讨《一岛津评论别刷》一。夕犷,尸阴夕‘,夕五了,工,,℃玉一,二。△久了一件